Dishevelled 2 siRNA载体的构建和有效干扰质粒的筛选

来源 :口腔生物医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fragile2001000
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根据目的基因设计5个siRNA靶点,与pMAGic4.0载体形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞,含抗生素的LB琼脂平板上筛选转化子,菌落PCR鉴定阳性克隆,测序验证正确的转化子,质粒抽提,Lipofectamine 2000将质粒瞬时转染RAW264.7细胞,通过绿色荧光信号观察转染,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达的变化。结果:菌落PCR和测序证实所构建的siRNA质粒目的基因大小、 Five siRNA targets were designed according to the target gene, and a recombinant plasmid was constructed with the pMAGic4.0 vector. The recombinant plasmid was transformed into DH5α competent cells. The transformants were screened on LB agar plates containing antibiotics. The positive clones were identified by colony PCR. The correct transformants and plasmids The plasmid was transiently transfected into RAW264.7 cells by Lipofectamine 2000. The expression of Dvl2 gene was detected by real-time quantitative RT-PCR. Results: Colonies PCR and sequencing confirmed the gene size of the constructed siRNA plasmid,
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