【摘 要】
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[目的]为探究适用于观赏海棠SSR反应分子标记研究的最佳PCR反应条件,采用正交设计法对观赏海棠SSR-PCR体系进行优化,并利用优化体系筛选适于观赏海棠的多态性SSR引物.[方法]
【机 构】
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南方现代林业协同创新中心,南京林业大学林学院,江苏 南京210037
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[目的]为探究适用于观赏海棠SSR反应分子标记研究的最佳PCR反应条件,采用正交设计法对观赏海棠SSR-PCR体系进行优化,并利用优化体系筛选适于观赏海棠的多态性SSR引物.[方法]以6个二倍体观赏海棠DNA模板为材料,采用L16(45)正交试验对DNA模板浓度、Taq酶浓度、引物浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度进行优化实验,确立了观赏海棠SSR-PCR最佳反应体系.[结果]得出15 μL优化体系各成分为:DNA模板5 mg/L、Taq酶1.25 U、引物0.3μmol/L、Mg2+2 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、1 ×Buffer1.5 μL.利用优化体系在73对苹果属SSR引物中筛选出15对条带清晰、多态性丰富、重复性好的SSR引物并确定各引物的退火温度,其多态信息含量均大于0.25.[结论]正交试验结果达到优化目的,利用优化体系筛选的15对多态性引物可直接应用于观赏海棠SSR分子标记实验中,为观赏海棠品种鉴定、分类以及遗传育种等研究提供了有效工具.
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