【摘 要】
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目的 构建人β防御素1( hBD1)稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法 将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS-7细胞),经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RNA,用RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达；收集细胞培养上清液,用Western blot检测hBD1基因蛋白的表达；将含有表达产物hBD1的细胞培养上
【机 构】
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730000兰州大学基础医学院病理生理研究所,730000兰州大学基础医学院病理生理研究所，甘肃省新药临床前研究重点实验室,甘肃省人民医院,730000兰州大学基础医学院病理生理研究所,甘肃省人民医院
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目的 构建人β防御素1( hBD1)稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法 将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS-7细胞),经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RNA,用RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达；收集细胞培养上清液,用Western blot检测hBD1基因蛋白的表达；将含有表达产物hBD1的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合,37℃孵育不同时间后涂布于LB平板,以各实验组和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率.结果 经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株,在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因hBD1的表达,在表达产物hBD1的作用下,多重耐药鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌存活率和多重耐药肺炎克雷伯杆菌的存活率可以分别降至9%、22%和50%,多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的存活率同对照组没有明显差异.结论 成功获得hBD1稳定表达细胞株,目的基因hBD1的表达产物对多种多重耐药菌均具有抗菌活性。
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肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CoxA16）为手足口病的主要病原体.江苏与山东、河南、安徽交界的区域是我国两大手足口病高发地区之一,本文对2008年4月上旬至6月中旬江苏12个市城乡63批次355份临床诊断为手足口病病人的咽拭子标本进行了病原分离,并对全部182个分离毒株进行鉴定,以了解江苏手足口病流行的病原特征。
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