【摘 要】
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目的探讨周期性张力对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化的血管平滑肌细胞(VSMCs)的表型的调节机制。方法原代全骨髓法培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞。作成脂、成骨、成平滑肌细胞方向诱导,验证BMSCs的多向分化潜能。将细胞分为4组:A组用含10μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)的完全培养基培养,B组用幅度10%、频率1 Hz周期性张力诱导,C组采用TGF-β1+周期性张力联
【机 构】
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400016重庆医科大学附属第一医院血管外科,400016重庆医科大学附属第一医院血管外科,400016重庆医科大学附属第一医院血管外科
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目的探讨周期性张力对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化的血管平滑肌细胞(VSMCs)的表型的调节机制。
方法原代全骨髓法培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞。作成脂、成骨、成平滑肌细胞方向诱导,验证BMSCs的多向分化潜能。将细胞分为4组:A组用含10μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)的完全培养基培养,B组用幅度10%、频率1 Hz周期性张力诱导,C组采用TGF-β1+周期性张力联合诱导,D组用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基培养作对照。3 d后观察诱导后的细胞形态,并行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肌动蛋白(α-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、钙调节蛋白1(calponin1)、钙调节蛋白3(calponin3)的m RNA表达水平,Western blot观察细胞内α-actin、SM-MHC、calponin1、calponin3蛋白表达水平。
结果经流式细胞术鉴定,所培养细胞为BMSCs。诱导3 d后,A、B、C 3组的VSMC标志物均较D组明显升高,以SM-MHC和calponin3增加为主。A组(0. 919 2±0. 028 1)较B组(0. 823 6± 0. 024 6)的SM-MHC蛋白表达水平高,但低于C组(1. 043 1±0. 090 7),其差异均有统计学意义(P< 0. 05)。C组中calponin3 m RNA表达量比蛋白表达量变化更明显,而calponin1蛋白表达量和m RNA表达量同步增高。
结论周期性张力能够诱导BMSCs分化为VSMCs,对分化的VSMCs的表型调节还需要细胞因子的参与。
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