脉络膜新生血管(CNV)是多种眼底疾病造成视力损害的的主要原因之一。近年来的研究发现单核细胞来源的巨噬细胞(F4/80)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在CNV的形成过程中发挥作用,但它们在新生血管发生早期的动态表达及机制仍不明确。
目的观察CNV模型小鼠在CNV发展早期局部组织中巨噬细胞和MCP-1表达的动态变化。
方法SPF级8周龄雄性野生C57BL/6小鼠105只,用氪离子激光仪对小鼠的任意一侧眼在距视盘2~3倍视盘直径处的3∶00、6∶00、9∶00和12∶00方位进行激光光凝以建立CNV动物模型。按照随机数字表法将CNV小鼠模型随机分不同时间点组,分别于光凝后6、12、24、48和72 h各处死小鼠,摘取眼球组织后制备眼球壁组织切片、脉络膜铺片和视网膜色素上皮(RPE)-脉络膜复合体切片,采用苏木精-伊红染色,观察视网膜光凝后眼球壁各层的组织病理学改变和炎症反应情况;采用免疫荧光双标记技术测定小鼠视网膜-脉络膜组织中F4/80和MCP-1的表达和分布;采用免疫荧光技术检测小鼠脉络膜铺片中F4/80的表达和分布;采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠RPE-脉络膜组织中F4/80 mRNA的相对表达量;采用ELISA法定量检测小鼠RPE-脉络膜组织中MCP-1质量分数。以光凝后6 h组小鼠非实验眼作为正常对照。
结果视网膜光凝后6 h光学显微镜下可见光凝区Bruch膜、RPE层和脉络膜层均破裂,视网膜外核层连续性中断,随着光凝后时间的延长,可见局部炎症细胞浸润和组织水肿,光凝后72 h可见光凝区边缘出现血管内皮细胞增生。光凝后6 h可见光凝区RPE及脉络膜组织中F4/80表达,周围组织中可见MCP-1表达,随着光凝后时间延长MCP-1表达强度减弱,而F4/80表达仍增强。正常对照组及光凝后6、12、24、48和72 h组RPE-脉络膜复合体中MCP-1蛋白的质量分数分别为(31.25±4.73)、(276.31±4.20)、(331.95±5.86)、(221.24±4.42)、(179.89±4.10)和(130.80±5.90)pg/mg,总体比较差异有统计学意义(F=1 416.46,P=0.00),光凝后12 h其质量分数达峰值,之后逐渐下降,但光凝后各时间组MCP-1蛋白的质量分数均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。各组RPE-脉络膜复合体中F4/80 mRNA的相对表达量总体比较差异有统计学意义(F=762.72,P=0.00),光凝后随着时间延长F4/80 mRNA的相对表达量逐渐升高,与正常对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。
结论实验性CNV形成早期伴随着明显的炎症反应,趋化因子MCP-1主要在CNV形成的起始阶段发挥作用,而巨噬细胞的聚积和活化在CNV形成和发展过程中起促进作用。