研究miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、细胞周期及凋亡的调控效应。
方法化学合成miR-145的模拟物，采用瞬时转染的方法过表达miR-145。采用实时PCR方法检测miR-145的表达。MTS方法检测过表达miR-145对HaCaT细胞增殖的影响。流式细胞仪分析过表达miR-145对细胞周期及凋亡的影响。采用荧光素酶实验，实时PCR和Western印迹鉴定NRAS是否为miR-145的靶基因。
结果与阴性对照（NC ）mimics转染组相比，miR-145 mimics转染组miR-145表达水平上调（85.00±1.21）倍，两组差异有统计学意义（t= 115.90, P< 0.001）。转染miR-145 mimics有抑制HaCaT细胞的增殖作用（F= 8.76，P= 0.008）；转染后的时间因素（24、48、72、96 h）对细胞有影响（F= 17.85, P< 0.001），转染mimics和培养时间之间不存在交互作用（F= 1.21, P= 0.18）。与NC mimics转染组相比，miR-145 mimics转染组的早期凋亡、晚期凋亡细胞比例均明显增加，差异有统计学意义（18.9%±4.1％比4.3%±1.2%，t= 7.126, P< 0.01；9.3%±2.3％比3.6%±1.6%，t= 12.38, P< 0.01）。与NC mimics转染组相比，miR-145 mimics转染组HaCaT细胞的G2及S期细胞比例均明显降低，差异均有统计学意义（6.26%±1.2％比19.36%±3.45%，t=7.610，P= 0.017; 7.91%±1.3％比18.56% ± 5.23%，t= 7.230, P= 0.019），而处于G1期的细胞比例升高，差异也有统计学意义（85.83%±5.2％比62.08% ± 6.23%，t= 11.78, P= 0.007）。与NC mimics联合psi-CHECK2-NRAS-wild组相比，在293T细胞中共转染miR-145 mimics和psi-CHECK2-NRAS-wild质粒，其荧光素酶值明显下降，miR-145可抑制含NRAS mRNA 3'UTR报告基因的荧光素酶表达（t= 11.09, P= 0.008 ）；而将NRAS mRNA 3'UTR报告基因上miR-145的结合位点进行突变后，转染miR-145 mimics对含NRAS mRNA 3'UTR报告基因的荧光素酶表达无明显的影响（P> 0.05）。实时PCR和Western印迹结果表明，过表达miR-145 mimics后，NRAS mRNA表达水平未出现明显变化（P> 0.05），对NRAS蛋白水平的表达有明显的抑制（1.52±0.07比0.20±0.02, t= 28.43, P< 0.01 ）。
结论miR-145可能通过NRAS影响HaCaT细胞的周期从而抑制细胞的增殖，同时促进HaCaT细胞的凋亡。