【摘 要】
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目的 探讨血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)对脑心肌炎病毒(encephalo-myocarditis virus,EMCV)体外增殖的影响及其作用机制.方法 将EMCV按MOI
【机 构】
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西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室,甘肃兰州730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030;西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室,
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目的 探讨血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)对脑心肌炎病毒(encephalo-myocarditis virus,EMCV)体外增殖的影响及其作用机制.方法 将EMCV按MOI=0.001感染C2C12细胞,于感染24及48 h时,采用qPCR及Western blot法检测C2C12细胞中VCAM-1基因mRNA转录及VCAM-1蛋白表达水平.将表达质粒pcDNA3.1-VCAM-1及siVCAM-1序列分别转染C2C12细胞,qPCR及Western blot法检测C2C12细胞中VCAM-1过表达及抑制表达情况,再将EMCV按MOI=0.001感染,qPCR及TCID50法分别检测病毒拷贝数及病毒滴度.Pull-down试验检测VCAM-1与EMCV结构蛋白的相互作用.结果 C2C12细胞中VCAM-1基因mRNA转录及VCAM-1蛋白表达水平随着EMCV感染时间的延长明显降低(P＜0.001).转染表达质粒pcDNA3.1-VCAM-1后,C2C12细胞中VCAM-1基因mRNA转录及VCAM-1蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),EMCV感染后,病毒拷贝数及病毒滴度均显著降低(P＜0.001).转染siVCAM-1序列后,C2C12细胞中VCAM-1基因mRNA转录及VCAM-1蛋白表达水平显著降低(P＜0.001),EMCV感染后,病毒拷贝数及病毒滴度均显著升高(P＜0.001).VCAM-1与病毒蛋白VP1、VP2有明显的相互作用,与VP3无相互作用.结论 VCAM-1在EMCV体外增殖过程中起负调控作用,可能是通过VCAM-1与EMCV结构蛋白VP1、VP2的相互作用实现的.
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