【摘 要】
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目的 探讨胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)对口腔鳞状细胞癌细胞血管生成拟态(VM)的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测口腔鳞状细胞癌细胞系(SCC-9、SCC-15、SCC-25、SAS和Tca8113)和人口腔上皮角质细胞HOK中CTHRC1 mRNA表达水平.选择CTHRC1 mRNA表达量最高的口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-9为研究对象,通过慢病毒感染构建CTHRC1基因低表达的SCC-9细胞,将细胞分为空白对照组(Blank)、阴性对照干扰组(NC-shRNA)和
【机 构】
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三亚市人民医院(口腔科),海南 三亚 572000
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目的 探讨胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)对口腔鳞状细胞癌细胞血管生成拟态(VM)的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测口腔鳞状细胞癌细胞系(SCC-9、SCC-15、SCC-25、SAS和Tca8113)和人口腔上皮角质细胞HOK中CTHRC1 mRNA表达水平.选择CTHRC1 mRNA表达量最高的口腔鳞状细胞癌细胞系SCC-9为研究对象,通过慢病毒感染构建CTHRC1基因低表达的SCC-9细胞,将细胞分为空白对照组(Blank)、阴性对照干扰组(NC-shRNA)和CTHRC1干扰组(CTHRC1-shRNA).采用qRT-PCR法和蛋白质印迹法检测慢病毒感染的各组SCC-9细胞中CTHRC1基因mRNA和蛋白表达水平;三维培养观察各组SCC-9细胞VM管腔数量;酶谱凝胶法检测各组SCC-9细胞上清液中分泌型基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性;Transwell法检测各组SCC-9细胞迁移侵袭情况;蛋白质印迹法检测各组SCC-9细胞血管生成相关蛋白VEGF和VE-cadherin的表达水平.结果 6种细胞株(HOK、SCC-9、SCC-15、SCC-25、SAS和Tca8113)的CTHRC1 mRNA表达水平差异有统计学意义,F=27.318,P<0.05.两两多重比较显示,其他细胞株较HOK细胞表达均升高,差异均有统计学意义,均P<0.05.Blank组、NC-shR-NA组和CTHRC1-shRNA组SCC-9细胞中CTHRC1 mRNA和蛋白表达水平(FmRNA=6.766;F蛋白=9.757)、VM管腔形成数量(F=48.211)、上清液MMP-2和MMP-9的活性(FMMP-2=45.121;FMMP-9=49.420)、迁移和侵袭细胞数量占比(F迁移=361.176;F侵袭=203.144)、VEGF和VE-cadherin蛋白表达水平(FVEGF=37.402;FVE-cadherin=19.816)差异均有统计学意义,均P0.05,CTHRC1-shRNA组SSC-9细胞各指标水平均下降,差异均有统计学意义,均P<0.05.结论 CTHRC1在人口腔鳞状细胞癌细胞中高表达,沉默CTHRC1能通过下调VEGF和VE-cadherin蛋白表达水平,抑制人口腔鳞状细胞癌细胞SCC-9的VM形成.
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