【摘 要】
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目的 探讨视网膜色素上皮移植术后供体细胞与宿主细胞间紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达情况.方法 采用CFDA-SE(10 μmol/L)标记供体视网膜色素上皮细胞,通过玻璃体显
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第五医院大庆市人民医院眼科
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目的 探讨视网膜色素上皮移植术后供体细胞与宿主细胞间紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达情况.方法 采用CFDA-SE(10 μmol/L)标记供体视网膜色素上皮细胞,通过玻璃体显微手术将细胞悬液植入同种异体青紫蓝兔视网膜下腔,移植术后应用眼底彩色照相机、光学相干断层扫描仪(optical coherence tomography,OCT)、荧光素眼底血管造影术(fluorescence fundusangiography,FFA)观察记录移植术后眼底情况,并分别在不同时间点处死实验动物,在荧光显微镜下观察标记细胞的位置并作紧密连接的结构蛋白ZO-1和occludin的免疫组化分析.结果 细胞在接种后2h开始贴壁,ld后光镜下可见黑色圆形贴壁细胞.部分贴壁的细胞胞浆向外延伸,细胞内色素颗粒仍聚集于胞核周围,充盈整个胞浆.传2～3代后细胞中色素颗粒逐渐减少、脱失.荧光显微镜下观察,抗细胞角蛋白染色阳性率几乎达100％,证明培养的细胞是RPECs.免疫组化结果显示,在受体视网膜组织中,occludin及ZO-1阳性染色定位于RPECs的细胞膜和(或)靠近胞膜的细胞质内,接近顶部1/3处,呈棕黄色的颗粒状、点状结构,与紧密连接位于上皮细胞侧面顶端的分布一致.移植后30、60d时S ZO-1/S (F=224.29,P＜ 0.05)、S occludin/S (F=273.90,P＜ 0.05)与正常眼比较,差异有统计学意义.结论 视网膜色素上皮移植术后可嵌插于宿主视网膜色素上皮之间并形成新的血视网膜外屏障.
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