【摘 要】
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目的 了解多氯联苯化合物诱发哺乳动物细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hprt)基因的分子突变谱.方法 采用自行构建的重组中国仓鼠肺细胞株(V79-hCYP2E1-hSULT1 A1),用空2,4,4\'-三氯联苯(PCB 28) (10、20、40μmol/L)、2,2\',5,5\'-四氯联苯(PCB 52)(80 μmol/L)和阳性对照N-二乙基亚硝胺(NDEA,200μmol/L)染毒,实验结束后收集突变克隆进行细胞扩增,提取细胞总RNA,逆转录得cDNA,采用PCR扩增Hprt基因
【机 构】
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广东药科大学药学院,广东广州510006;南方医科大学公共卫生学院
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目的 了解多氯联苯化合物诱发哺乳动物细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hprt)基因的分子突变谱.方法 采用自行构建的重组中国仓鼠肺细胞株(V79-hCYP2E1-hSULT1 A1),用空2,4,4\'-三氯联苯(PCB 28) (10、20、40μmol/L)、2,2\',5,5\'-四氯联苯(PCB 52)(80 μmol/L)和阳性对照N-二乙基亚硝胺(NDEA,200μmol/L)染毒,实验结束后收集突变克隆进行细胞扩增,提取细胞总RNA,逆转录得cDNA,采用PCR扩增Hprt基因片段,并进行基因测序,统计分析各化学物诱发突变发生率及分子突变谱.结果 对照组细胞Hprt基因的自发突变中单个碱基置换占88.2％,PCB 28诱发的突变除单碱基置换外,呈现多类型突变特征,包括两个以上碱基置换、外显子缺失、移码突变及小缺失;随着PCB 28浓度增加,单碱基置换所占比例呈下降趋势,即由68.8％下降到33.3％;并且高浓度时以小缺失为主要突变类型(占66.7％).PCB 52和NDEA诱发突变类型则类似自发突变组.自发突变的单碱基置换主要为A∶T→G∶C改变,而PCB 28(20 μmol/L)诱发的碱基置换主要为G∶C→A∶T.PCB 28组(20 μmol/L)突变克隆细胞平均碱基置换次数高于自发突变组.结论 PCB 28诱发突变呈现多类型突变特征,与自发突变的分子突变谱有差异,可能与该化合物特异的致突变机理有关.
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