【摘 要】
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目的观察S100A6基因沉默对人食管癌Eca109细胞增殖活性及迁移能力的影响。方法查找人S100A6mRNA序列,设计针对其编码区的siRNA序列;根据siRNA序列设计合成shRNA并构建shRNA重
【机 构】
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第二军医大学长征医院药学部; 解放军454医院药剂科;
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目的观察S100A6基因沉默对人食管癌Eca109细胞增殖活性及迁移能力的影响。方法查找人S100A6mRNA序列,设计针对其编码区的siRNA序列;根据siRNA序列设计合成shRNA并构建shRNA重组表达载体;用阳离子脂质体转染重组质粒至Eca109细胞,于转染后48h,采用real-time PCR法检测细胞中S100A6mRNA表达量,蛋白质印迹法检测细胞中S100A6蛋白表达量;MTT法检测细胞增殖活性,绘制细胞生长曲线;通过细胞划线法检测基因沉默对于肿瘤细胞迁移能力的影响。结果成功构建了针对S100A6基因的shRNA真核表达载体;通过脂质体转染的方法可在Eca109细胞内高效沉默S100A6,细胞转染后48h,与未转染细胞比较,S100A6 mRNA表达量降低,且差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),蛋白表达量检测结果与mRNA检测结果一致;S100A6基因沉默可明显抑制对数生长期Eca109细胞增殖活性,与未转染细胞比较,差异有统计学意义(P<0.01);S100A6基因沉默可明显抑制对数生长期Eca109细胞迁移能力。结论通过shRNA表达载体途径可在Eca109细胞中有效沉默S100A6基因,S100A6基因沉默能够显著抑制Eca109细胞增殖活性及迁移能力。
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