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目的
前期研究证实GJA3 (c.559C>T)突变即GJA3(p.P187S)为一遗传性白内障家系的致病基因，本课题旨在对遗传性白内障致病基因GJA3 (c.559C>T)进行功能分析及致病机制研究。
方法构建野生型GJA3和突变型GJA3 (c.559C>T)真核表达载体，分别进行人宫颈癌细胞(HeLa)细胞转染，通过免疫荧光染色方法观察蛋白亚细胞定位差异；运用Western印迹方法检测野生型与突变体GJA3(P187S)在蛋白表达水平的差异；通过TUNEL染色及流式细胞技术比较野生型与突变型GJA3(P187S)凋亡率差异。
结果共聚焦显微镜观察发现GJA3-WT组蛋白与GJA3(P187S)组突变体蛋白均在细胞膜定位，没有亚细胞定位的差异。Western印迹方法检测野生型GJA3-WT组与突变型GJA3(P187S)组蛋白的表达情况，结果显示GJA3(P187S)突变并未明显影响GJA3蛋白即缝隙链接蛋白46的表达水平。TUNEL染色及流式细胞分析结果显示GJA3(P187S)突变体组凋亡率较高。
结论本研究对一遗传性白内障家系的致病基因GJA3 (c.559C>T)进行突变功能研究，结果表明GJA3 (c.559C>T)突变未改变GJA3蛋白的亚细胞定位及蛋白表达水平，但可引起该组细胞的凋亡率呈上升趋势。