腺病毒载体介导的人IL-24基因对HL-60白血病细胞体外培养的影响

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sheygy
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目的 构建人IL-24的腺病毒载体Ad-IL24,观察Ad-IL24对HL-60细胞体外培养的影响.方法 以pcDNA3.0-IL24重组质粒为模板PCR扩增IL-24基因,酶切并连接到带有绿色荧光蛋白(GFP)标记的pAdTrack-CMV质粒上,Pme Ⅰ线性化重组质粒pAdTrack-CMV-IL24,并与腺病毒质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL24,经Pac Ⅰ线性化后转染QBI-293A细胞,收获重组病毒Ad-IL24.将它感染HL-60细胞,通过激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)、MTT和流式细胞术(FCM)法检测IL-24对HL-60细胞生长的影响,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变,ELISA检测重组病毒对HL-60细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.结果 成功构建重组腺病毒载体pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL24并获得高滴度的重组腺病毒Ad-IL24,各种检测方法表明IL-24基因能抑制HL-60细胞生长,诱导凋亡,IL-24还能下调HL-60细胞Bcl-2的表达并刺激它分泌二级细胞因子IFN-γ和TNF-α.结论 IL-24能抑制HL-60细胞生长、诱导凋亡,它可通过下调HL-60细胞Bcl-2的表达并刺激其分泌具有抗肿瘤活性的二级细胞因子来发挥效应。

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