【摘 要】
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采用反转录PCR的方法,从人类肝组织细胞系L02中扩增Gadd45a基因的全长读码框,并将其克隆到pCDNA3.0上,该重组质粒命名为pC/Gadd45a。同时,采用化学方法合成Gadd45a基因的干扰
【基金项目】
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863项目(2006AA02Z126);973计划(2004CB518804);浙江省科技厅重点项目(2006C23006)
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采用反转录PCR的方法,从人类肝组织细胞系L02中扩增Gadd45a基因的全长读码框,并将其克隆到pCDNA3.0上,该重组质粒命名为pC/Gadd45a。同时,采用化学方法合成Gadd45a基因的干扰序列,经退火后克隆至pCDNA3.0,命名为pC/shRNA。实验结果证实重组质粒pC/Gadd45a和pC/shRNA构建成功。然后,将pC/Gadd45a和pC/shRNA转染L02细胞后发现,Gadd45a基因在mRNA水平和蛋白水平上分别提高表达和降低表达。Gadd45a真核表达载体及其干扰载体的成功构建,为深入研究Gadd45a蛋白对肿瘤发生发展的作用以及该蛋白在细胞信号网络中的作用提供参考。
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