【摘 要】
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目的 建立动态检测肺泡巨噬细胞内自噬形成过程的细胞模型.方法 构建绿色荧光真核表达载体(PAsGreen2-N1-LC3),应用转染技术将该质粒导入大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选并获
【机 构】
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430060,武汉大学人民医院胸外科
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目的 建立动态检测肺泡巨噬细胞内自噬形成过程的细胞模型.方法 构建绿色荧光真核表达载体(PAsGreen2-N1-LC3),应用转染技术将该质粒导入大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选并获得稳定表达的细胞株.真核细胞中PAsGreen2-N1-LC3的表达分别用荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测.结果 成功获得4株转染细胞株,荧光显微镜下观察NR8383 PAsGreen2-N1-LC3转染细胞株的绿色荧光率在90％[(92.25±2.45)％]以上.Western blot结果证实在加入等量自噬激活剂(雷帕霉素)培养后,实验组微管相关蛋白1轻链3(LC3)/β-肌动蛋白(β-actin)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均高于对照组(P＜0.01),运用RT-PCR技术检测转染细胞株的LC3基因相对扩增量是正常细胞LC3基因相对扩增量的5.188 611倍.结论 用含有PAsGreen2-N1-LC3真核表达载体转染NR8383细胞,经G418筛选,可成功建立能稳定表达PAsGreen2-N1-LC3基因的巨噬细胞株,并可对活细胞内自噬过程进行有效动态检测.
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