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探讨RNA靶向沉默LSD1基因后对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。
方法将LSD1短发夹RNA(shRNA)真核表达载体经脂质体转染入Jurkat细胞,采用RQ-PCR及Western blot方法观察LSD1 mRNA及蛋白表达;采用MTT法观察细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、procaspase-3的表达及组蛋白H3K4me、H3K4me2、H3K4me3、Act-H3水平。
结果LSD1 shRNA转染Jurkat细胞后,LSD1 mRNA、蛋白表达均下调(P<0.05);LSD1 shRNA组48 h细胞增殖率低于转染阴性质粒(Neg- shRNA)组和对照组(P<0.05),LSD1 shRNA组细胞凋亡率[(41.34±3.58)%]高于NegshRNA组[(3.45±1.54)%]和对照组[(1.76±0.52)%](P<0.05);凋亡抑制蛋白Bcl-2、凋亡效应蛋白procaspase-3的表达下调,Bax表达上调,H3K4me、H3K4me2、Act-H3表达上调,而H3K4me3水平未见明显变化。
结论沉默LSD1基因可抑制Jurkat细胞增殖,激活凋亡相关蛋白诱导细胞凋亡,机制可能与调节组蛋白H3K4甲基化水平有关。