【摘 要】
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目的利用串联亲和纯化和液相质谱技术研究HBcAg在人肝癌细胞株HepG2中的相互作用蛋白。方法构建HBcAg重组质粒pMSCV-HBc,采用串联亲和纯化技术富集HepG2细胞中HBcAg结合蛋白,
【机 构】
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解放军第三军医大学基础部,解放军第三军医大学免疫学研究所,
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目的利用串联亲和纯化和液相质谱技术研究HBcAg在人肝癌细胞株HepG2中的相互作用蛋白。方法构建HBcAg重组质粒pMSCV-HBc,采用串联亲和纯化技术富集HepG2细胞中HBcAg结合蛋白,电泳分离免疫沉淀复合物并从胶中切取HBcAg结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相质谱技术分析从而鉴定HBcAg相互作用蛋白。结果成功构建HBcAg重组表达载体,在HepG2细胞中筛选到4个HBcAg相互用蛋白:CD59糖蛋白前体、MCM3相关蛋白、LOC100049716蛋白和ANKRD26蛋白。结论人肝癌细胞中HBcAg相互作用蛋白CD59等可能在HBV感染中起到重要作用。
Objective To study the interaction protein of HBcAg in human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 by using in-line affinity purification and liquid mass spectrometry. Methods HBcAg recombinant plasmid pMSCV-HBc was constructed. HBcAg-binding protein was enriched in HepG2 cells by tandem affinity purification. The immunoprecipitation complex was separated by electrophoresis and the band of HBcAg-binding protein was excised from the gel. Technical analysis to identify HBcAg interacting proteins. Results The HBcAg recombinant expression vector was successfully constructed and four HBcAg-interacting proteins were screened in HepG2 cells: CD59 glycoprotein precursor, MCM3-related protein, LOC100049716 protein and ANKRD26 protein. Conclusion HBcAg-interacting protein CD59 in human hepatoma cells may play an important role in HBV infection.
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