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目的 构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican-3,GPC3）的第4代慢病毒载体，并进行慢病毒载体鉴定、包装及病毒滴度测定。方法 通过分子克隆技术从本实验室第2代anti-GPC3-CAR的慢病毒载体上得到anti-GPC3-CAR序列，并与人源化IL-15/IL-15Rα序列连接后插入慢病毒载体pCDH，重组质粒经菌落PCR及测序鉴定。将构建的重组质粒分别与辅助质粒共转染293T细胞，48 h后收集上清并进行病毒滴度测定，流式细胞术验证anti-GPC3-CAR的表达。结果 成功构建了第4代anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体，并成功包装了慢病毒颗粒。结论 本研究构建第4代anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体，可高效包装出含CAR基因的慢病毒颗粒，一定程度上可提高底盘细胞的功能及持久性，为后期CAR修饰的免疫疗法奠定了基础。