【摘 要】
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目的 研究血清剥夺对心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将人心肌细胞AC16分为血清剥夺组(细胞在无胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h)、对照组(细胞在含10％胎牛血清的DMEM
【机 构】
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海军军医大学(第二军医大学)长海医院心血管内科,上海,200433上海中冶医院心血管内科,上海,200941;
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目的 研究血清剥夺对心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将人心肌细胞AC16分为血清剥夺组(细胞在无胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h)、对照组(细胞在含10％胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h).采用CCK-8法检测心肌细胞活力,EdU实验法检测细胞DNA合成水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平及线粒体膜电位变化,蛋白质印迹分析检测心肌细胞中caspase-9、Bcl-2、P53、增殖细胞核抗原(PCNA)、cyclin D1、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt5a、Axis抑制蛋白1(Axin1)、蓬乱蛋白2(Dvl2)、蓬乱蛋白3(Dvl3)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达水平.结果 CCK-8实验结果显示对照组的光密度值为1.93±0.01,血清剥夺组的光密度值为1.08±0.08,后者为前者的55.8％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);细胞DNA合成受到抑制,血清剥夺组细胞DNA合成水平下降为对照组的65.6％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).血清剥夺诱导了心肌细胞的凋亡,对照组凋亡率为(6.34±0.47)％,血清剥夺组凋亡率为(56.83±1.90)％,后者为前者的8.9倍,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);血清剥夺组心肌细胞线粒体膜电位下降,但与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).蛋白质印迹分析结果显示,血清剥夺促进了心肌细胞中caspase-9蛋白的表达,同时抑制了心肌细胞中Bcl-2、P53、PCNA、cyclin D1蛋白的表达;血清剥夺抑制了心肌细胞中β-catenin、Wnt5a、Axin1、Dvl2、Dvl3、LRP6蛋白的表达.结论 血清剥夺可抑制心肌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
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