【摘 要】
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目的:初步探讨缺氧/复氧(H/R)损伤过程心肌细胞株H9C2中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser633磷酸化水平的变化及其可能的调控机制.方法:采用缺氧4h培养后恢复常氧条件培养12、16
【机 构】
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贵州医科大学病理生理学教研室 贵阳,550025
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目的:初步探讨缺氧/复氧(H/R)损伤过程心肌细胞株H9C2中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser633磷酸化水平的变化及其可能的调控机制.方法:采用缺氧4h培养后恢复常氧条件培养12、16或24 h造成H9C2细胞H/R损伤.选取缺氧4 h/复氧12 h(H4/R12)进行后续实验.①H/R后用钙离子泵抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG),1.0×10-6 mol/L处理细胞1h;用PI3K/Akt抑制剂LY294002(5.0×10-5 mol/L)预处理1h,再进行H/R及TG处理1h.②用PP2A/PP1抑制剂冈田酸Okadaic acid(OA)低剂量(5×10-8 mol/L)、高剂量(1×10-6 mol/L)预处理细胞30 min,再进行H/R.用Western blot检测eNOS总蛋白及eNOSSer633磷酸化水平,化学比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量.结果:①H/R损伤后心肌细胞eNOS Ser633磷酸化水平降低(P＜0.05);TG明显上调eNOS Ser633磷酸化水平(P＜0.05),LY294002预处理可抑制TG的上调作用(P＜0.05);低剂量OA、高剂量OA预处理均可上调H/R损伤后eNOS Ser633磷酸化水平(P＜0.05),且高、低剂量组间无明显差异.②H/R损伤后培养基中NO含量减少(P＜0.05);TG、低剂量OA、高剂量OA处理均可增加H/R损伤后培养基中NO含量(P＜0.05).结论:H/R损伤可明显降低H9C2细胞中eNOS Ser633水平,这可能是由于H/R过程中既有PI3K/Akt通路被抑制,又有PP2A活性增强所致.
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