【摘 要】
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用脂质体lipofectamine 2000介导携带有AcGFP报告基因的pAcGFP-bFADD质粒转染Hela细胞,并通过调整质粒DNA、脂质体的浓度及转染时间来优化转染条件,转染后12h在荧光显微镜下
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,西北农林科技大学动物科技学院,山西农业大学生命科学院
【基金项目】
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“十一五”国家高技术研究发展计划(863)(No.2006AA107Z197);“十一五”国家科技支撑计划重大项目(No.2006BAD01A10)资助
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用脂质体lipofectamine 2000介导携带有AcGFP报告基因的pAcGFP-bFADD质粒转染Hela细胞,并通过调整质粒DNA、脂质体的浓度及转染时间来优化转染条件,转染后12h在荧光显微镜下计数阳性细胞,MTT法检测各转染条件下Hela细胞的活性。结果表明,将2.4μg的pAcGFP-bFADD质粒与3.0μL lipofectamine 2000制备转染复合物与Hela细胞作用6h可以获得62.3%的转染效率,并且保持较高的细胞存活率(83%)。当质粒DNA与脂质体的量增加至3.2μg和6.0μL时,转染复合物对细胞的毒性作用明显增强,对细胞的抑制率可达42.98%,与对照组相比,差异极显著(P<0.01);条件优化后AcGFP-bFADD融合基因于转染后72h达到表达高峰,绿色荧光阳性细胞所占比率达到64%。
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