【摘 要】
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目的本研究旨在构建β-内酰胺酶E166C突变体并于大肠杆菌中原核表达,纯化及鉴定该蛋白。方法利用体外PCR扩增获得β-内酰胺酶pen P突变质粒并通过DNA测序鉴定,将重组质粒转化
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目的本研究旨在构建β-内酰胺酶E166C突变体并于大肠杆菌中原核表达,纯化及鉴定该蛋白。方法利用体外PCR扩增获得β-内酰胺酶pen P突变质粒并通过DNA测序鉴定,将重组质粒转化至BL21（DE3）中,以IPTG诱导蛋白表达。菌液超声裂解后首先以镍柱纯化融合蛋白,蛋白水解酶HRV3C除去融合标签,然后用凝胶过滤层析色谱进一步纯化得到目标蛋白,最后应用SDS-PAGE和电喷雾质谱法鉴定纯化的目标蛋白。结果成功构建了β-内酰胺酶pen P-E166C突变质粒,并且先后通过亲和镍柱和凝胶过滤层析柱纯化获得了纯
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