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目的
观察靶向抑制Hedgehog信号通路对肝细胞癌增殖、转移的影响。
方法构建Smo shRNA质粒,建立Smo稳定低表达的肝癌QGY-7701细胞系。采用流式细胞术、CCK8及Transwell实验检测Smo基因沉默前后QGY-7701细胞周期、凋亡、增殖及转移能力的变化;通过裸鼠皮下种植模型研究Smo基因沉默对肝癌细胞体内生长的抑制作用,电镜下观察肝癌细胞超微结构的变化。
结果实时PCR(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测显示成功构建shR-Smo稳定基因转染的肝癌细胞系。流式细胞周期实验显示,与对照组比较,shR-Smo组G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;凋亡、CCK8及Transwell实验显示Smo基因沉默能够显著增加肝细胞癌凋亡百分率到(5.46±1.46)%,增殖活性显著下降,迁移率减少到(7.82±2.14)%;裸鼠皮下种植模型显示Smo基因沉默能够明显抑制体内肝癌细胞的生长,电镜发现Smo基因沉默后肝癌细胞中溶酶体明显增多。
结论阻断Hedgehog信号通路可降低肝细胞癌恶性程度,靶向抑制Hedgehog信号通路有望成为肝细胞癌基因治疗的新选择。