【摘 要】
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目的: 构建和表达可调控鼠蛋白脂质蛋白(PLP)-免疫球蛋白重组腺病毒载体.方法: 采用常规分子生物学方法, 从WT-1杂交瘤细胞中抽提总RNA,克隆小鼠Ig重链Fc基因.将编码PLP139-1
【机 构】
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第二军医大学附属长海医院实验诊断科,上海,200433
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目的: 构建和表达可调控鼠蛋白脂质蛋白(PLP)-免疫球蛋白重组腺病毒载体.方法: 采用常规分子生物学方法, 从WT-1杂交瘤细胞中抽提总RNA,克隆小鼠Ig重链Fc基因.将编码PLP139-151的DNA与信号肽设计在引物上, 经两次克隆可形成可分泌型PLP-Ig.经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接, 鉴定后在HEK293细胞中包装.获得高滴度病毒后, 用Western blot鉴定目的基因的表达.结果: PLP-Ig重组腺病毒经测序、限制性内切酶酶切分析及PCR等鉴定, 同预期结果相一致.Western blot检测病毒感染的细胞, 发现目的基因得到特异性表达且可被四环素调节.结论: 构建了可调控的小鼠PLP-Ig重组腺病毒载体并得到正确表达, 为进一步基因治疗实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)和诱导免疫耐受奠定了基础.
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