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目的 建立检测甲型肝炎(hepatitis A,HA)灭活疫苗(MRC-5细胞)中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的HPLC 法,并进行验证.方法 色谱条件:选用反相色谱柱;流动相为水相-有机相,水相为四丁基氢氧化铵的磷酸盐溶液,有机相为乙腈;流速为1.0 mL/min;检测波长为257 nm;进样量为20 μL;柱温为30℃;保留时间为10 min.筛选色谱柱并优化流动相条件(水相与有机相的比例、pH 及磷酸盐).验证方法的适用性、专属性、线性范围、准确度、精密度、耐用性、定量限和检测限.采用该方法检测3 批HA灭活疫苗原液供试品中EDTA-2Na残留量.结果 最适色谱条件:采用美国Thermo公司的C18色谱柱(250 mm x 4.6 mm,5 μm),水相与有机相比例为9:1,pH为2.4,磷酸盐为0.01 mol/L磷酸二氢铵.EDTA-2Na对照品色谱峰的理论塔板数大于10 000,分离度大于1.5;仅对照品有色谱峰,且无其他色谱峰干扰;对照品在0.2～20 μg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y = 20 482.18X+0.512 6,R2 = 0.999 9;准确性验证中,浓度为2、5、10 μg/mL 的加标样品平均回收率分别为97.44％、100.6％及100.4％,RSD为1.6％;5 μg/mL的加标样品重复性及中间精密度的RSD分别为1.4％和1.6％;定量限及检测限分别为0.2 和0.05 μg/mL;不同pH(2.0、2.4、3.0)流动相的色谱峰面积的RSD 分别为0.24％、0.31％及0.18％,相对误差(RE)分别为99.25％、99.12％及99.33％.3批供试品均未检出EDTA-2Na.结论 成功建立了检测HA灭活疫苗中EDTA-2Na残留量的HPLC 法,该方法具有良好的专属性、线性范围、准确度、精密度及耐用性,为HA 灭活疫苗的质量控制研究奠定了基础.