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目的
观察临床收集的白念珠菌敏感株形成生物膜的结构、耐药性及相关基因的表达;初步探讨并筛选易于成膜的白念珠菌的基因表达。
方法2015年1月至2015年12月天津市第一中心医院临床送检,血培养分离的白念珠菌共108株,选取其中唑类药物敏感株58株。用无菌体内留置导管建立白念珠菌生物膜体外模型;倒置显微镜观察白念珠菌生物膜结构;透射电子显微镜观察超微结构;微量液基稀释法M27-A2方案行药物敏感试验;PCR法检测白念珠菌als3、xog1、bgl2、efg1等基因的表达情况。对数据进行配对t检验。
结果倒置显微镜下观察到白念珠菌细胞沿菌丝聚集,形成不同层的膜状结构。透射电子显微镜下生物膜形成后白念珠菌细胞膜增厚、线粒体增多、细胞活性增加。白念珠菌生物膜形成后对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑耐药;而对棘白菌素类药物卡泊芬净、米卡芬净的抑制50%受试菌所需最低抑菌浓度(MIC50)也有不同程度的增加,但未到达耐药。als3基因表达在形成生物膜前的菌株之间存在差异:als3高表达的白念珠菌易于形成生物成膜(t=3.645,P<0.01),成膜后表达下降(t=2.491,P=0.013)。生物膜形成后efg1、bg1和xog基因表达均降低(均P<0.05),但成膜与否的培养前白念珠菌表达差异无统计学意义(P>0.05)。
结论白念珠菌生物膜形成后,对唑类抗真菌药物耐药,而对棘白菌素类药物保持敏感;白念珠菌als3基因表达的差异可以作为筛选易于成膜的白念珠菌的指标。