【摘 要】
：
目的 研制羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAT)纳米粒,评价其作为新的内耳基因转染载体的可能性.方法 用化学共沉淀-水热合成法制备HAT载体.经DNA电泳做不同pH值和HAT含量的DNA结
【机 构】
：
中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉头颈外科学教研室,中南大学粉末冶金国家重点实验室
论文部分内容阅读
目的 研制羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAT)纳米粒,评价其作为新的内耳基因转染载体的可能性.方法 用化学共沉淀-水热合成法制备HAT载体.经DNA电泳做不同pH值和HAT含量的DNA结合实验,了解HAT纳米粒对DNA的结合和保护作用;用四甲基偶氮唑盐法观察HAT纳米粒对宫颈癌上皮Hela细胞的毒性;用Hela细胞和小鼠耳蜗原代螺旋神经节细胞做神经营养素3(neurotrophin 3,NT3)体外转染实验(绿色荧光蛋白基因荧光显微镜法)及NT3的蛋白印迹分析,观察HAT介导的NT3基因对活细胞的体外转染能力和基因表达情况;经实验性兴奋性耳毒性损伤豚鼠的耳蜗外淋巴腔灌注HAT纳米载体-含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒载体-NT3基因复合物(HAT-pEGFPC2-NT3),用免疫组化(二氨基联苯胺法)观察NT3在耳蜗的表达,以了解HAT纳米载体在活体动物耳蜗介导基因转染的能力.结果 含量250.0 μg/ml,pH值3～7是这种长约40～50 nm的短棒状HAT纳米粒能完全结合重组质粒pEGFPC2-NT3的最低含量混悬液和最佳pH环境,并可有效保护基因不被核酸酶(DNase Ⅰ)破坏.四甲基偶氮唑盐法观察HAT纳米粒从62.5 μg/ml至500.0 μg/ml 4种混悬液对Hela细胞存活率无明显影响,细胞形态无变化.EGFP荧光显微镜观察显示,HAT纳米载体对Hela细胞的基因转染率为15.7%±2.6%(-x±s);将HAT-pEGFPC2-NT3转染培养的小鼠耳蜗神经元,也可见明显的EGFP表达.NT3免疫组化显示,向实验性兴奋性耳蜗损害豚鼠的耳蜗外淋巴腔灌注HAT-pEGFPC2-NT3,可见活体耳蜗神经元内有明显的NT3蛋白表达.结论 HAT纳米粒不仅可介导NT3基因的体外转染,而且可介导其耳蜗活体转染;尽管转染率有待提高,但由于没有病毒载体转染造成的生物威胁,仍不失为一种很有研究价值的非病毒型内耳基因治疗载体.
其他文献
采用波长为800 nm,脉冲宽度为120 fs的飞秒激光对提拉法和温梯法生长的YAG晶体进行辐照.并对辐照后的样品进行吸收光谱及电子顺磁共振谱(EPR)的检测.结果表明,提拉法的晶体在
基于具有双周期解的常微分方程,提出了一种构造非线性微分方程双周期解的新方法,在计算机符号软件帮助下方法可实现机械化.应用此方法于非线性耦合标量场方程,得到了该方程的
介绍了一种波长为 1319nm的连续Nd∶YAG激光器 ,分析了 1319nm激光的辐射跃迁能级 ,论述了抑制10 6 4nm激光的生成从而提高 1319nm激光输出等关键技术 ,研究了光学镜片的镀膜
在共面非对称几何条件下,利用能壳上跃迁矩阵元的后滞形式和双势公式,对快电子碰撞下氢原子的单离化,提出了一个新的计算方法.通过分解动能算符,并且略去两电子的质心运动和
为解决微粒形体变化对微粒测量结果的影响,在半椭圆模型理论模型的基础上,对高斯分布散射场下任意形体微粒散射的影响因子进行了讨论.建立了影响因子与形体特征参量和微粒粒
The reaction of N-n-Bu4MnO4 with Mn(Oac) 2 · 4H2O and butenoic acid in nonaqueous solvents leads to the formation of the complex [Mn3O(O2CCH = CHCH3) 6(py) 3]
以钨粉和正硅酸乙酯为原料 ,采用溶胶凝胶技术和旋转镀膜方法 ,在玻璃衬底上制备出了气致变色WO3 SiO2 纳米复合薄膜 .采用椭偏仪、场发射扫描电子显微镜 (FE SEM )、红外光
目的 探讨分析汶川地震伤致脂肪栓寨综合征(FES)的早期诊断标准和治疗措施.方法 对在2008年5月12日发生的汶川大地震期间收治的13例脂肪栓塞综合征患者,行动态血气分析及血常
通过世界煤炭海运贸易分析,讨论影响世界海运煤炭贸易发展的因素,分析世界煤炭运输市场运力供求关系,从而对世界煤炭运输市场进行预测.
Through the analysis of the world
清末,在清政府的治理下,中国境内哈萨克族形成了相对稳定和集中的分布态势,但这一局面在杨增新治新时期发生了变化。本文主要论述杨增新治新时期哈萨克族的迁徙活动,揭示和分