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（1.黑龙江威凯洱生物技术有限公司；2.哈尔滨凯程制药有限公司）
摘 要：本实验对五味子配方颗粒剂的提取工艺及五味子配方颗粒剂的质量标准进行研究。按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加12倍量水，浸泡5小时，回流提取3次，每次1.5小时。本工艺稳定、可行、收率高，本质量标准可以用于五味子配方颗粒剂的质量控制。
关键词：五味子配方颗粒剂；提取；质量标准
五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.或华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果实。唐等《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。五味子具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功效。五味子常用于久嗽虚喘、梦遗滑精、自汗、盗汗、津伤口渴、遗尿尿频、内热消渴、心悸失眠等。五味子具有保肝、保护心脑血管、抗氧化、抗衰老、镇静、催眠等多种功能[1-5]。本实验对五味子配方颗粒剂的提取工艺及五味子配方颗粒剂的质量标准进行研究。
1 仪器与试药
HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）；STIER M8000D实验室洗瓶机（广州安一生物科技有限公司）；LC-310液相色谱系统（江苏天瑞仪器股份有限公司）；15L多功能型超声波清洗器（上海声彦超声波仪器有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；RMB 9044奥豪斯电子天平（上海书培实验设备有限公司）。乙腈（上海甲美精细化工有限公司）；甲醇（山东浩中化工科技有限公司）；氯仿（山东浩中化工科技有限公司）；乙醇（山东浩中化工科技有限公司）；正己烷（山东浩中化工科技有限公司）；石油醚（30-60℃）（山东浩中化工科技有限公司）；甲酸乙酯（南京维之诚化学试剂有限公司）；甲酸（南京维之诚化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 药材粉碎
分别选用五味子药材最初粉、粗粉、细粉进行水提，结果最粗粉、粗粉、细粉的水煎液呈乳浊状，难以用常规方法滤过，确定以五味子药材为原料进行试验。
2.1.2 提取次数
取五味子，加12倍量水，浸泡5小时，回流提取1小时，过滤，浓缩提取膏，将药渣加12倍量水，回流提取1小时，过滤，浓缩提取膏，再将药渣加12倍量水，回流提取1小时，过滤，浓缩提取膏。
2.1.3 加水倍数
取五味子，分别提取三次，回流提取时间为1小时，第一次加10倍水，浸泡5小时，连续三次，第二次加12倍水，浸泡5小时，连续三次，第三次加14倍水，浸泡5小时，连续三次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。
2.1.4 提取时间
取五味子，分别提取三次，加12倍水，浸泡5小时，第一次回流提取时间为1小时，连续三次，第二次回流提取时间为1.5小时，连续三次，第三次回流提取时间为2.0小时，连续三次，别过滤，合并滤液，减压浓缩。
2.2 正交试验设计
选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行優选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 质量标准研究
3.1 检查应符合《中国药典》2015版附录颗粒剂通则项下的检查项目。重金属不得超过百万分之二十、砷盐不得超过百万分之十。
3.2 含量测定
3.2.1 色谱条件。色谱柱为KromasilTM C18（250mm×4.6mm，5μm）；乙腈-水（68：32），为流动相；检测波长为224nm；流速1.0mL·min-1。
3.2.2 供试品溶液的制备。取五味子配方颗粒剂，精密称定，精密加水20ml，超声使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加正己烷萃取提取4次，每次20毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解（溶解时加少量氯仿），转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤。取续滤液，即得。量取提取浓缩膏适量，加一倍水稀释，加正己烷萃取提取4次，每次50毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解（溶解时加少量氯仿），转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤。取续滤液，即得。
3.2.3 对照品溶液的制备。精密称取五味子醇甲对照品，用甲醇超声溶解并稀释至每1mL溶液中含五味子醇甲30μg的对照品溶液。
4 鉴别
供试液制备：取五味子配方颗粒剂，精密加水20ml，超声使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.将氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：取五味子，加氯仿20ml.回流提取30分钟，将氯仿蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液制备：取五味子醇甲对照品，加氯仿制成每lml含1mg的溶液，作为对照品溶液。阴性对照液制备：取五味子配方颗粒剂的辅料，精密加水20ml，超声使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.将氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为阴性对照液溶液。分别将供试液、对照药材溶液、阴性对照液、对照品溶液点于硅胶CF254加0.3%羧甲基纤维素钠的自制板，以石油醚（30-60℃）一甲酸乙酯-甲酸（15：5：l），置紫外光灯（254nm）下检视。
5 實验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加12倍量水，浸泡5小时，回流提取3次，每次1.5小时。本工艺稳定、可行、收率高，本质量标准可以用于五味子配方颗粒剂的质量控制。
参考文献
[1]齐治，崔景荣，田建柱，秦波，楼之岑.五味子果实挥发油对中枢神经系统的药理作用研究[J].北京医科大学学报，1988（06）.
[2]陈延镛，舒增宝，黎莲娘.五味子的研究——北五味子降谷丙转氨酶有效成分的分离和鉴定[J].中国科学，1976（01）.
[3]刘涛，蔡绍先，汪达丽，陈玮莹，邹立，郑宇琼，温博贵.五味子对急性四氯化碳中毒大鼠肝整合素α1的影响[J].医学临床研究，2008（12）.
[4]熊雅婷，黄芳，徐丽华，窦昌贵，马世平.五味子提取物对小鼠睡眠剥夺后脑组织自由基和一氧化氮的影响[J].中国药科大学学报，2006（03）.
[5]王雯雯，仰榴青，李永金，吴向阳，邹艳敏，赵江丽.南、北五味子提取物对小鼠镇静、催眠作用的影响[J].江苏大学学报（医学版），2008（02）.
摘 要：本实验对五味子配方颗粒剂的提取工艺及五味子配方颗粒剂的质量标准进行研究。按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加12倍量水，浸泡5小时，回流提取3次，每次1.5小时。本工艺稳定、可行、收率高，本质量标准可以用于五味子配方颗粒剂的质量控制。
关键词：五味子配方颗粒剂；提取；质量标准
五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.或华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果实。唐等《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。五味子具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功效。五味子常用于久嗽虚喘、梦遗滑精、自汗、盗汗、津伤口渴、遗尿尿频、内热消渴、心悸失眠等。五味子具有保肝、保护心脑血管、抗氧化、抗衰老、镇静、催眠等多种功能[1-5]。本实验对五味子配方颗粒剂的提取工艺及五味子配方颗粒剂的质量标准进行研究。
1 仪器与试药
HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）；STIER M8000D实验室洗瓶机（广州安一生物科技有限公司）；LC-310液相色谱系统（江苏天瑞仪器股份有限公司）；15L多功能型超声波清洗器（上海声彦超声波仪器有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；RMB 9044奥豪斯电子天平（上海书培实验设备有限公司）。乙腈（上海甲美精细化工有限公司）；甲醇（山东浩中化工科技有限公司）；氯仿（山东浩中化工科技有限公司）；乙醇（山东浩中化工科技有限公司）；正己烷（山东浩中化工科技有限公司）；石油醚（30-60℃）（山东浩中化工科技有限公司）；甲酸乙酯（南京维之诚化学试剂有限公司）；甲酸（南京维之诚化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 药材粉碎
分别选用五味子药材最初粉、粗粉、细粉进行水提，结果最粗粉、粗粉、细粉的水煎液呈乳浊状，难以用常规方法滤过，确定以五味子药材为原料进行试验。
2.1.2 提取次数
取五味子，加12倍量水，浸泡5小时，回流提取1小时，过滤，浓缩提取膏，将药渣加12倍量水，回流提取1小时，过滤，浓缩提取膏，再将药渣加12倍量水，回流提取1小时，过滤，浓缩提取膏。
2.1.3 加水倍数
取五味子，分别提取三次，回流提取时间为1小时，第一次加10倍水，浸泡5小时，连续三次，第二次加12倍水，浸泡5小时，连续三次，第三次加14倍水，浸泡5小时，连续三次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。
2.1.4 提取时间
取五味子，分别提取三次，加12倍水，浸泡5小时，第一次回流提取时间为1小时，连续三次，第二次回流提取时间为1.5小时，连续三次，第三次回流提取时间为2.0小时，连续三次，别过滤，合并滤液，减压浓缩。
2.2 正交试验设计
选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行優选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 质量标准研究
3.1 检查应符合《中国药典》2015版附录颗粒剂通则项下的检查项目。重金属不得超过百万分之二十、砷盐不得超过百万分之十。
3.2 含量测定
3.2.1 色谱条件。色谱柱为KromasilTM C18（250mm×4.6mm，5μm）；乙腈-水（68：32），为流动相；检测波长为224nm；流速1.0mL·min-1。
3.2.2 供试品溶液的制备。取五味子配方颗粒剂，精密称定，精密加水20ml，超声使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加正己烷萃取提取4次，每次20毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解（溶解时加少量氯仿），转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤。取续滤液，即得。量取提取浓缩膏适量，加一倍水稀释，加正己烷萃取提取4次，每次50毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解（溶解时加少量氯仿），转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤。取续滤液，即得。
3.2.3 对照品溶液的制备。精密称取五味子醇甲对照品，用甲醇超声溶解并稀释至每1mL溶液中含五味子醇甲30μg的对照品溶液。
4 鉴别
供试液制备：取五味子配方颗粒剂，精密加水20ml，超声使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.将氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：取五味子，加氯仿20ml.回流提取30分钟，将氯仿蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液制备：取五味子醇甲对照品，加氯仿制成每lml含1mg的溶液，作为对照品溶液。阴性对照液制备：取五味子配方颗粒剂的辅料，精密加水20ml，超声使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.将氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为阴性对照液溶液。分别将供试液、对照药材溶液、阴性对照液、对照品溶液点于硅胶CF254加0.3%羧甲基纤维素钠的自制板，以石油醚（30-60℃）一甲酸乙酯-甲酸（15：5：l），置紫外光灯（254nm）下检视。
5 實验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加12倍量水，浸泡5小时，回流提取3次，每次1.5小时。本工艺稳定、可行、收率高，本质量标准可以用于五味子配方颗粒剂的质量控制。
参考文献
[1]齐治，崔景荣，田建柱，秦波，楼之岑.五味子果实挥发油对中枢神经系统的药理作用研究[J].北京医科大学学报，1988（06）.
[2]陈延镛，舒增宝，黎莲娘.五味子的研究——北五味子降谷丙转氨酶有效成分的分离和鉴定[J].中国科学，1976（01）.
[3]刘涛，蔡绍先，汪达丽，陈玮莹，邹立，郑宇琼，温博贵.五味子对急性四氯化碳中毒大鼠肝整合素α1的影响[J].医学临床研究，2008（12）.
[4]熊雅婷，黄芳，徐丽华，窦昌贵，马世平.五味子提取物对小鼠睡眠剥夺后脑组织自由基和一氧化氮的影响[J].中国药科大学学报，2006（03）.
[5]王雯雯，仰榴青，李永金，吴向阳，邹艳敏，赵江丽.南、北五味子提取物对小鼠镇静、催眠作用的影响[J].江苏大学学报（医学版），2008（02）.