稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的Vero细胞系的建立及鉴定

来源 :中国动物传染病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:robert610
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(目的)为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCoV)核衣壳(Nucleocapsid, N)蛋白的非洲绿猴肾(Africa green monkey cell, Vero)细胞系,(方法)本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,嘌呤霉素加压筛选目的细胞。(结果)RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,Western Blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测,与ELISA检测结果符合率达到100%。(结论)本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系,为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。
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