【摘 要】
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目的探讨建立1日龄新生大鼠海马脑片离体培养及氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)模型的方法，为早产儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)基础研究提供方法。方法选择1日龄新生SD大鼠40只，分离海马，切成400 μm厚脑片，分别培养1 d、3 d、5 d、7d、10 d、15 d、21 d，观察海马脑片的形态
【机 构】
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首都医科大学附属北京友谊医院儿科 100050,首都医科大学附属北京友谊医院儿科 100050,首都医科大学附属北京友谊医院儿科 100050,首都医科大学附属北京友谊医院儿科 100050,
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目的探讨建立1日龄新生大鼠海马脑片离体培养及氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)模型的方法，为早产儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)基础研究提供方法。
方法选择1日龄新生SD大鼠40只，分离海马，切成400 μm厚脑片，分别培养1 d、3 d、5 d、7d、10 d、15 d、21 d，观察海马脑片的形态学变化，并通过碘化丙啶(propidium iodide，PI)染色法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)活性检测法评估脑片培养过程中活力情况；取培养稳定的海马脑片进行OGD，按是否行OGD及OGD时间分为正常组、OGD 1 h组、1.5 h组、2 h组、2.5 h组、3 h组、3.5 h组，用PI染色法和LDH活性检测法评估海马脑片损伤情况，明确制作OGD模型最佳OGD时间。
结果(1)海马脑片活力：海马脑片培养1 d后PI染色可见大面积红色强荧光，之后逐渐减少，5 d及以后基本消失；1 d时LDH活性最高，5 d时较1 d、3 d明显下降(P<0.05)，5～15 d LDH活性稳定。(2)OGD时间确定：OGD后正常培养24 h，OGD 1 h组、1.5 h组、2 h组海马脑片荧光微弱，与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)；OGD 2.5 h组海马CA区可见强荧光，OGD 3 h组、3.5 h组海马CA区、齿状回(dentate gyrus，DG)区均出现强荧光，3组LDH活性均较正常组明显升高(P<0.05)，推荐OGD时间为3 h。
结论1日龄新生大鼠海马脑片培养第5～15天生长稳定，是后续实验的最佳时间段；培养5 d后行OGD 3 h可以建立稳定的海马脑片OGD模型。
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