【摘 要】
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旨在构建牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果。从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列，利用生物学方法预测其B、T细胞表位；将获得的序列进行连接，重组获得新肽段（命名为AKK）,通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三
【基金项目】
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国家自然科学基金（31572492）； 天津市兽医生物技术科研创新团队资助项目（TD12-5019）； 天津市科技支撑项目（19ZXBTSN00250）； 天津市农业动物繁殖与健康养殖重点实验室开放基金课题（2020zdkf02）； 天津市研究生科
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旨在构建牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果。从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列，利用生物学方法预测其B、T细胞表位；将获得的序列进行连接，重组获得新肽段（命名为AKK）,通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构；PCR分别扩增上述基因序列，构建重组表达载体GV658-AKK-E0-E2、GV658-AKK、GV658-E0、GV658-E2,并将上述构建成功的无内毒素重组质粒转染至MDBK细胞，通过蛋白免疫印迹。经PCR扩增获得2 910、1 170、951和729 bp大小的目的条带，与预计相符；经蛋白免疫印迹验证，在34和68 kDa处有AKK蛋白及E0-E2蛋白的融合表达；经流式细胞术验证显示，在CD3+、CD4+细胞占比上，共表达组极显著高于PBS组，显著高于E0组，与ELISA检测IgG抗体水平结果一致。研究表明，试验成功设计了BVDV多表位序列AKK,并成功构建真核表达载体，AKK、E0、E2蛋白高效表达，共表达组能更好地刺激机体的体液免疫和细胞免疫应答。
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