【摘 要】
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目的:克隆人表皮生长因子受体2胞外段基因(HER2-ECD)的cDNA,构建重组杆状病毒Bacmid-HER2-ECD.方法:从Her2高表达的人乳腺癌细胞系SK-BR-3中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应
【机 构】
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吉林大学基础医学院免疫学教研室,吉林大学基础医学院分子生物学教研室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的:克隆人表皮生长因子受体2胞外段基因(HER2-ECD)的cDNA,构建重组杆状病毒Bacmid-HER2-ECD.方法:从Her2高表达的人乳腺癌细胞系SK-BR-3中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HER2ECD基因cDNA.利用T/A克隆连接法,首先构建pMD18-T-HER2-ECD重组质粒,并对基因进行测序.然后通过酶切连接构建供体质粒pFastBac-HER2-ECD.将供体质粒转化入DH10Bac菌与空Bacmid发生转座,得到重组Bacmid-HER2ECD.对重组Bacmid进行PCR法和点杂交鉴定.结果:pMD18-T-HER2ECD内插入片段序列与实际序列一致;pFastBac-HER2ECD经酶切鉴定与预期结果一致.重组Bacmid-HER2ECD通过PCR法能得到目的大小片段,并且能够与特异性探针发生结合.结论:成功地完成了HER2ECD基因的克隆和重组Bacmid-HER2ECD的构建.
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