【摘 要】
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目的 观察补肾益髓方药物血清对小鼠小胶质细胞BV2神经炎症的影响,探讨其可能的作用机制.方法 1μg/mL脂多糖(LPS)诱导建立BV2细胞炎症模型,将BV2细胞随机分为正常组、LPS组、补肾益髓方药物血清(5％、10％、20％)组和空白血清(5％、10％、20％)组,CCK-8法检测细胞活力;在此基础上,将细胞分为正常组、LPS组和20％补肾益髓方药物血清组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arginase-1)蛋白表达,RT-qPCR检测细胞
【机 构】
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首都医科大学中医药学院,中医络病研究北京市重点实验室,北京 100069;首都医科大学中心实验室,北京 100069;首都医科大学附属北京天坛医院,北京 100070
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目的 观察补肾益髓方药物血清对小鼠小胶质细胞BV2神经炎症的影响,探讨其可能的作用机制.方法 1μg/mL脂多糖(LPS)诱导建立BV2细胞炎症模型,将BV2细胞随机分为正常组、LPS组、补肾益髓方药物血清(5％、10％、20％)组和空白血清(5％、10％、20％)组,CCK-8法检测细胞活力;在此基础上,将细胞分为正常组、LPS组和20％补肾益髓方药物血清组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arginase-1)蛋白表达,RT-qPCR检测细胞内miRNA-155-5p表达;采用慢病毒转染制备miRNA-155-5p过表达模型,另设20％补肾益髓方药物血清组、阴性对照组和miRNA-155-5p过表达组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内iNOS、Arginase-1及CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)蛋白表达.结果 与正常组比较,LPS组细胞活力显著降低(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著升高(P<0.01),Arginase-1表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,20％补肾益髓方药物血清组细胞活力显著升高(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著降低(P<0.01),Arginase-1表达显著升高(P<0.01).与20％补肾益髓方药物血清组比较,miRNA-155-5p过表达组iNOS表达显著升高(P<0.01),Arginase-1和C/EBPβ表达显著降低(P<0.01).结论 补肾益髓方可抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,其作用机制与提高细胞活力、上调Arginase-1表达、下调iNOS表达、抑制miRNA-155信号通路有关.
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