【摘 要】
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目的:探讨苦参碱对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549的放疗敏感性的影响及其可能机制.方法:采用不同浓度(0、1、2、3、4 g/L)苦参碱处理A549细胞48 h,MTT法检测其增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)和20％IC50;根据实验目的将A549细胞分为空白对照组、苦参碱(1.22 g/L)组、放疗(4 Gy X射线照射处理)组、联合组(1.22 g/L苦参碱处理48 h后,再进行4 Gy X射线照射处理).采用MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞放射
【机 构】
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南华大学附属南华医院肿瘤内科,湖南 衡阳421002;南华大学附属南华医院肝胆外科,湖南 衡阳421002
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目的:探讨苦参碱对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549的放疗敏感性的影响及其可能机制.方法:采用不同浓度(0、1、2、3、4 g/L)苦参碱处理A549细胞48 h,MTT法检测其增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)和20％IC50;根据实验目的将A549细胞分为空白对照组、苦参碱(1.22 g/L)组、放疗(4 Gy X射线照射处理)组、联合组(1.22 g/L苦参碱处理48 h后,再进行4 Gy X射线照射处理).采用MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞放射敏感性,并绘制剂量?细胞存活曲线;采用2?脱氧葡萄糖类似物(2?NBDG)法检测细胞葡萄糖摄取率;比色法检测细胞乳酸产量、己糖激酶(HK)以及丙酮酸激酶(PK)的活性;Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved?Caspase?3、Bax、Bcl?2,通路蛋白p?mTOR、mTOR及糖酵解相关蛋白己糖激酶2(HK2)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白的表达水平.结果:苦参碱呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖活性(P<0.05),作用48 h的IC50为(2.69±0.11)g/L,选择20％IC50值1.22 g/L作为苦参碱后续作用剂量.苦参碱联合放疗处理后A549细胞的拟合存活曲线较单独放疗处理左移,放射增敏比为1.324.与苦参碱或单独放疗处理组比较,苦参碱联合放疗处理可显著降低A549细胞增殖活性(P<0.05),升高细胞凋亡率(P<0.05),降低A549细胞葡萄糖摄取率、乳酸产量及PK活性(P<0.05),并能显著上调cleaved?Caspase?3、Bax蛋白表达水平(P<0.05),下调Bcl?2和PKM2蛋白表达及p?mTOR水平(P0.05).结论:苦参碱能升高A549细胞的放疗敏感性,其机制可能与抑制mTOR信号通路介导的糖酵解作用有关.
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