【摘 要】
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为构建可用于插入外源基因的犬2型腺病毒(CAV-2)E3区表达载体,用Kpn I对CAV-2 DNA进行酶切,回收含E3区的Kpn I B片段并将其克隆到质粒pBluescript II KS(+)中,获得了正向和反
【机 构】
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成都军区联勤部军事医学研究所,解放军军需大学军事兽医研究所,东北农业大学,北京军区军犬队
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为构建可用于插入外源基因的犬2型腺病毒(CAV-2)E3区表达载体,用Kpn I对CAV-2 DNA进行酶切,回收含E3区的Kpn I B片段并将其克隆到质粒pBluescript II KS(+)中,获得了正向和反向插入的重组质粒,并对E3区进行了序列测定.根据E3区两末端的序列合成了两对突变引物,每对引物分别在E3区的24986bp及26360bp处各引入一个BglⅡ酶切位点.以E3区正向插入的重组质粒pBE3-2为模板,分别用两对突变引物经PCR法连续进行两次点突变,通过Bgl II酶切,最终筛选到在E3区的首尾两端各引入一个Bgl II酶切位点的突变重组质粒pBEM.利用Bgl II酶切将E3区切除约1.4kb的片段,然后在缺失部位插入了人工接头,接头设计了5个单一酶切位点,得到的pBE3L质粒可用于外源基因的插入.
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