【摘 要】
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目的 建立用于临床检验及研究的SSA 6 0 0 0 0抗原的提取及纯化方法。方法 利用牛脾组织提取粗抗原 ,采用阴离子交换层析法 (IEC)进行初纯化 ,再分别以分子筛及亲和层析法
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和
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目的 建立用于临床检验及研究的SSA 6 0 0 0 0抗原的提取及纯化方法。方法 利用牛脾组织提取粗抗原 ,采用阴离子交换层析法 (IEC)进行初纯化 ,再分别以分子筛及亲和层析法进一步提纯 ,并利用对流免疫电泳 (CIE)、免疫扩散 (ID)及免疫印迹 (IBT)法检测各纯化阶段提取液中的 6 0 0 0 0SSA抗原。结果 IEC(DE5 2 )初步提纯SSA抗原效佳。 0 15～ 0 35mol/LNaCl(溶于 0 0 1mol/L磷酸盐缓冲液pH 7 2中 )是最佳洗脱范围 ;分子筛方法 (SephadexG 10 0 )作为SSA抗原的进一步提纯方法不理想 ,杂蛋白存留较多。但可作为用于分析目的的初纯化方法 ;亲和层析方法可进一步纯化出 6 0 0 0 0SSA抗原。十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)转膜后氨基黑染色见只有一条条带位于 6 70 0 0～ 4 30 0 0。进一步行IBT证实其为 6 0 0 0 0SSA抗原。结论 利用牛脾粗抗原经IEC、亲和层析的方法提纯 6 0 0 0 0SSA抗原操作简便 ,纯化效果好 ,价格不高 ,能够成功地制备6 0 0 0 0SSA抗原 ,为开展 6 0 0 0 0SSA抗原在疾病中作用的研究创造了条件。
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