【摘 要】
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将番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC蛋白基因与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K -σC,转化大肠杆菌DH5α,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确.
【机 构】
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福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建,福州,350013福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建,福州,350013;
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将番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC蛋白基因与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K -σC,转化大肠杆菌DH5α,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确.纯化的重组质粒pPIC9K -σC用内切酶SacⅠ线性化,电转化毕赤酵母,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合,采用G418抗性梯度法筛选多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,通过SDS-PAGE 和Western-blot分析表达产物,结果表明目的蛋白得到了高效表达,并且具有免疫反应性.
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