血红素氧合酶-1基因真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达

来源 :华中科技大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:kkaJov2Qc88R
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目的克隆血红素氧合酶-1(HO-1)基因,并构建真核表达载体,建立重组HO-1蛋白的血管内皮表达细胞系。方法从大鼠脾脏中提取RNA,利用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR),克隆到鼠的HO-1基因,并对该基因片段进行T载体克隆、酶切鉴定和测序分析。将HO-1基因插入到真核表达载体pcDNA3中,利用脂质体介导将重组质粒转染血管内皮细胞ECV304细胞,经G418加压筛选后,对细胞进行间接免疫荧光和Western blot分析。结果DNA测序分析表明克隆的HO-1基因与文献报道一致,酶切鉴定证实基因正确地插
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