【摘 要】
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目的 分离、纯化和鉴定临床变异链球菌株，并构建该临床菌株的412c基因缺陷菌株，比较两者生长速率和致龋性。方法 随机收集无龋健康成人口腔牙菌斑样本，在唾液/变异链球菌杆菌肽琼脂（MSA）培养基中进行厌氧培养和筛选，通过菌斑形态观察、革兰氏染色、细菌生化反应和聚合酶链式反应（PCR）等方法对获得的临床分离株进行鉴定；将线性化重组质粒转入临床变异链球菌中进行同源重组，获得412c（hit）基因缺陷菌株
【机 构】
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贵州医科大学附属口腔医院牙体牙髓科
【基金项目】
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贵州省卫生健康委科学技术基金项目（gzwkj2022-164）； 贵州省科技计划项目（黔科合基础-ZK[2021]一般438）；
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目的 分离、纯化和鉴定临床变异链球菌株，并构建该临床菌株的412c基因缺陷菌株，比较两者生长速率和致龋性。方法 随机收集无龋健康成人口腔牙菌斑样本，在唾液/变异链球菌杆菌肽琼脂（MSA）培养基中进行厌氧培养和筛选，通过菌斑形态观察、革兰氏染色、细菌生化反应和聚合酶链式反应（PCR）等方法对获得的临床分离株进行鉴定；将线性化重组质粒转入临床变异链球菌中进行同源重组，获得412c（hit）基因缺陷菌株；在不同pH值脑心浸液（BHI）培养基中，比较两者的生长速率和耐酸特性；在含3%蔗糖的BHI培养基中，比较两者的产酸能力。结果 无龋健康成人口腔牙釉质表面菌斑在MSA培养基中生长的菌落形态均为深蓝色半球颗粒状突起、表面粗糙、边缘不齐；革兰氏染色后，显微镜油镜下可见革兰阳性蓝紫色球状菌体，呈长链状和短链状分散；生化反应和412c基因片段PCR Sanger测序鉴定结果显示，临床变异链球菌为“等效变异链球菌UA159”菌株。将hit-UP-pFW5-Down重组质粒线性化后转入临床变异链球菌中进行同源重组并筛选出412c基因缺陷变异链球菌株，该缺陷菌株生长速率相较其亲本菌株异常快速（与模式菌株ATCC 25175的缺陷菌株相似）,其产酸能力略弱于亲本菌株，耐酸性则显著强于亲本菌株。结论 临床分离变异链球菌株为“等效变异链球菌UA159”菌株，其412c基因与细菌生长调控相关，而412c基因缺陷变异链球菌株的生长速率显著高于其亲本菌株，更具致龋潜力。
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