目的探讨Rb和HSV-TK基因共转染增强HSV-TK/GCV系统"旁观者效应"的可能性及其机制.方法构建含长度为1.65kg Rb基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rb,用DOTAP将pcDNA3.1-Rb以及携带HSV-TK基因的质粒tgCMV/HyTK分别或共同导入骨肉瘤细胞株OS732.应用RT-PCR和Northern blot检测TK和Rb基因的表达;用细胞计数、流式细胞仪分析和软琼脂克隆形成实验观察细胞的生长状况;用半定量RT-PCR法、Western Blot和罗氏黄荧光传输法检测裂隙连接蛋白基因Connexin 43的表达和细胞间裂隙连接信息通讯的能力;用MTT法和混合共培养实验分别检测各种细胞对GCV的敏感性和HSV-TK/GCV系统的"旁观者效应".结果成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Rb;得到三种转基因的细胞株OS732TK、OS732Rb、OS732RbTK;并在mRNA水平检测到OS732TK和OS732RbTK细胞内HSV-TK基因的表达,在OS732Rb和OS732RbTK细胞内存在内源性和外源性Rb基因的表达;与OS732相比,OS732Rb和OS732RbTK细胞的形态发生改变,其生长速度减慢,软琼脂形成集落能力降低,细胞周期阻滞于G0G1期;OS732Rb细胞的Connex-in 43表达和细胞间信息通讯能力增强;仅TK阳性细胞OS732TK和OS732RbTK的存活率与GCV的浓度存在剂量依赖性关系,但在与TK阴性细胞混合共培养实验中,OS732和OS732Rb细胞均显示对GCV的敏感性,在相同处理条件下,OS732Rb细胞的存活率明显低于OS732细胞.结论Rb基因通过抑制骨肉瘤细胞的生长和提高细胞间信息通讯能力来增强HSV-TK/GCV系统的"旁观者效应".
Rb基因增强HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”的机制研究
【摘 要】
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目的探讨Rb和HSV-TK基因共转染增强HSV-TK/GCV系统"旁观者效应"的可能性及其机制.方法构建含长度为1.65kg Rb基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rb,用DOTAP将pcDNA3.1-Rb以及携带HSV-TK基因的质粒tgCMV/HyTK分别或共同导入骨肉瘤细胞株OS732.应用RT-PCR和Northern blot检测TK和Rb基因的表达;用细胞计数、流式细胞仪分析和软琼脂
【机 构】
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510080,广州,中山大学中山医学院病理教研室,
【出 处】
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中华骨科杂志
【发表日期】
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2003年23期
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