【摘 要】
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目的筛选三氯乙烯(TCE)诱导的人正常肝细胞（L-02细胞）组蛋白异常甲基化修饰，并探讨其在三氯乙烯致肝细胞毒性中的可能作用。方法以0、8.0 mmol/L的TCE处理L-02细胞24 h，采用酸法提取组蛋白，通过液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)鉴定和定量分析组蛋白差异甲基化修饰水平，以Western blot验证组蛋白H3K79二甲基化（H3K79 me2）及H3K79三甲基
【机 构】
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411105 湘潭大学化学学院；深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点
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目的筛选三氯乙烯(TCE)诱导的人正常肝细胞（L-02细胞）组蛋白异常甲基化修饰，并探讨其在三氯乙烯致肝细胞毒性中的可能作用。
方法以0、8.0 mmol/L的TCE处理L-02细胞24 h，采用酸法提取组蛋白，通过液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)鉴定和定量分析组蛋白差异甲基化修饰水平，以Western blot验证组蛋白H3K79二甲基化（H3K79 me2）及H3K79三甲基化(H3K79 me3)修饰水平，检测相对表达量。使用单细胞凝胶电泳检测细胞的DNA损伤水平。采用Western blot检测p53与H2AX的磷酸化修饰(ɤH2AX)的相对表达量。
结果TCE处理L-02细胞24 h后，质谱鉴定出28个肽段的36个表达有差异的组蛋白甲基化位点；L-02细胞经0、8.0 mmol/L TCE处理后，组蛋白H3K79 me3的相对表达量分别为1.00±0.06、0.70±0.09 (t=15.01，P=0.015)；组蛋白H3K79 me2的相对表达量分别为1.00±0.05、0.74±0.07 (t=16.69，P=0.018) ；DNA损伤的Olive尾距值分别为1.46±0.28、3.12±0.68 (t=15.22，P=0.018)；蛋白p53的相对表达量分别为1.00±0.04、1.24±0.04 (t=18.71，P=0.012)；ɤH2AX的相对表达量分别为1.00±0.03、1.56±0.11 (t=8.32，P=0.045)。
结论TCE引起L-02细胞组蛋白中H3K79 me2与H3K79 me3修饰水平发生变化，并且诱导DNA损伤，提示TCE可能通过DNA损伤导致H3K79 me2和H3K79 me3甲基化修饰的变化。
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