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目的
探讨阻断人动脉硬化平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)通路，进一步明确ERK、微小RNA(miR)-31与血小板源性生长因子(PDGF)-BB介导的平滑肌增殖之间的调控关系。
方法收集下肢动脉硬化闭塞患者下肢截肢标本，用贴壁法原代培养平滑肌细胞。相同代数的第3～6代血管平滑肌细胞(VSMCs)，加入PDGF-BB或PDGF-BB＋PD98059分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell法、Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测VSMCs增殖、迁移能力、表型标志性蛋白表达以及miR-31表达水平。
结果经组织贴壁法成功培养出原代平滑肌细胞。PDGF-BB诱导动脉硬化细胞的增殖率上调102%(P<0.05)和迁移率上调246%(P<0.05)，ERK阻断剂PD98059能阻滞PDGF-BB诱导的诱导作用，平滑肌细胞增殖抑制53%(P<0.05)和迁移抑制19%(P<0.05)。与空白组比较PDGF-BB处理后，收缩表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)含量下调38%(P<0.05)，增殖型蛋白骨桥蛋白(OPN)和miR-31含量分别上调116%(P<0.05)和386%(P<0.05)。与PDGF-BB组比较，PD98059 ＋ PDGF-BB处理后，α-SMA含量显著上调41%(P<0.05)，增殖型蛋白OPN和miR-31含量分别下调33%(P<0.05)和46%(P<0.05)。
结论阻断ERK通路可促进VSMCs由增殖型向收缩型转变，同时下调miR-31的表达水平，ERK-miR-31通路可能是调控人动脉硬化平滑肌细胞功能及表型的重要通路。