自制肝素亲和柱分离纯化载脂蛋白H及其抗体制备与鉴定

来源 :中国免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hongniba3493
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目的:自制肝素-琼脂糖6B亲和柱提纯人血清载脂蛋白H(apoH),免疫制备多克隆抗体,为大量制备与进一步研究做准备。方法:利用间接还原胺化法制备亲和层析柱,并优化反应条件。运用高氯酸沉淀、离子交换及亲和层析从人血清中纯化抗原,制备兔源多克隆抗体。结果:自制亲和柱肝素结合量约5mg/g(介质体积)。纯化的抗原经SDS-PAGE鉴定分子量约50kD,无杂带;16种氨基酸组成分析结果与报道一致。多克隆抗体与购置的国外抗体一样,在进行ELISA与dot-ELISA时与小牛血清白蛋白有交叉反应;但在变性且还原的条件下,Western blot结果显示无交叉反应。结论:自制亲和柱成本低、亲和性好、肝素结合稳定,用之分离纯化得到了高纯度apoH;兔多克隆抗体用于检测血清中载脂蛋白H含量时需进一步纯化。
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