【摘 要】
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受体结合域是决定病毒侵入宿主及其嗜性的关键因素.该研究目的 在于获得具有天然构象且反应原性良好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的受体结合域(receptor-binding domain,RBD)蛋白.根据PEDV S蛋白序列(GenBank登录号:AKN45969.1),设计、优化并合成其RBD部分基因序列,并将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacTM Dual上,得到了重组质粒pFBD-PER.将pFBD-PER转化到大肠杆菌DH1
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133000;中国农业科学院长春兽医研究所中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元,吉林长春130122;中国农业科学院长春兽医研究所中国医学科学院人兽共患病毒病防
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受体结合域是决定病毒侵入宿主及其嗜性的关键因素.该研究目的 在于获得具有天然构象且反应原性良好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的受体结合域(receptor-binding domain,RBD)蛋白.根据PEDV S蛋白序列(GenBank登录号:AKN45969.1),设计、优化并合成其RBD部分基因序列,并将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacTM Dual上,得到了重组质粒pFBD-PER.将pFBD-PER转化到大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒Bacmid-PER,通过脂质体转染至Sf9细胞中进行病毒拯救.转染120 h后,收取上清病毒液,盲传3代后收取Sf9细胞,利用间接免疫荧光法(IFA)及Western blot确定PEDV-RBD蛋白是否表达.结果 显示,重组质粒pFBD-PER酶切验证正确,重组杆粒Bacmid-PER成功构建,杆状病毒能够表达PEDV-RBD蛋白,且能与strep tag抗体发生特异性反应.IFA鉴定出现特异性绿色荧光.结果 表明,成功表达了PEDV-RBD蛋白且具有反应原性,为深入开展PEDV抗体制备、新型疫苗研发奠定基础.
其他文献
在前期克隆长角血蜱磷酸丙糖异构酶TIM基因基础上,将密码子优化后的TIM基因合成于真核质粒pPIC-ZaA中,并转入毕赤酵母X33进行真核表达.经镍柱纯化得到重组蛋白rTIM,相对分子质量大小约28 kDa.West-ern blot结果表明rTIM具有免疫原性.将rTIM与佐剂混合免疫新西兰大白兔,ELISA结果显示,免疫rTIM的新西兰大白兔与对照组相比具有较高的抗体水平.蜱叮咬试验结果显示,与对照组相比,试验组雌蜱饱血体质量(163.30±1.40) mg、产卵量(52.23±1.41) mg和卵孵
为探究畜牧业产业集聚对县域经济增长的影响,本研究以畜牧大省黑龙江省为例,利用2008-2017年黑龙江省66个县(市、区)面板数据,采用区位熵指数法测度出黑龙江省畜牧业产业集聚情况,采用可行广义最小二乘法(FGLS)实证检验畜牧业产业集聚对县城经济增长的影响.结果 表明:1)牧区、半牧区和非牧区畜牧业产业集聚度整体均呈下降趋势,产业集聚度平均值分别为3.27、2.49和1.54;2)整体回归显示,畜牧业产业集聚与县城经济增长之间存在明显的“U”型关系,不同产区分样本回归证实了畜牧业产业集聚与县城经济增长之
为编制拖拉机传动轴在实际作业工况下的载荷谱,针对拖拉机传动轴载荷具有单峰和多峰的特点及参数外推的局限性,运用拇指法(Rule-of-thumb,ROT)确实带宽,提出一种改进的基于核密度估计(Kernel density estimation,KDE)的载荷外推方法.通过搭建拖拉机传动轴无线扭矩测试系统并进行田间试验,获得了传动轴犁耕工况下的载荷数据,采用拇指法求得From-To雨流矩阵的最优带宽,并由雨流矩阵计算出核密度估计闽值,对大于阈值的载荷采用基于核密度估计的非参数法进行外推,小于阈值的载荷则按比
为实现对多样本小米硒含量的快速检测,以93份遗传背景不同的小米样品为研究对象,将样品分为校正建模集(样本容量n=51)和外部验证集(n=42),利用丹麦生产的NIRSTM DS2500台式近红外光谱仪采集光谱信息,通过标准正态变化(SNV)、卷积平滑(Detrend)等光谱预处理方法和偏最小二乘法(PLSR)建模方法建立脱壳谷子-小米总硒含量的测定模型,用工作流调用模型实现小米总硒含量的快速检测;采用国家标准规定的方法分别测定小米总硒含量,以此作为小米总硒含量预测模型的化学参比值.结果 表明:小米总硒含量
作为我国特有的发展问题,农村留守儿童问题长期以来备受学界和公众关注.但是,已有关于留守与农村儿童发展的研究主要集中在两者的短期关系,考察“留守经历”对农村儿童长期发展的影响研究相对鲜见.事实上,留守不仅对儿童期的短期影响产生作用,同时也将对其成年后的长期发展发挥长远影响,而后者与个体的生活与就业质量、国家的社会经济发展密切相关.基于此,本研究首先回顾了留守经历与农村儿童发展的基本逻辑,然后系统梳理了留守经历对学业成就、精神健康、就业质量、主观幸福感等长期影响的研究进展.在此基础之上,本研究指出了现有研究在
为探究肉鸡日粮中添加以两种氨基酸螯合成的新型复合氨基酸络合铁添加剂对内鸡生长性能、器官指数、血液指标、组织抗氧化性能和铁含量的影响,选用960只1日龄爱拔益加(AA)肉鸡公雏,随机分为6个处理,每个处理8个重复,每个重复20只雏鸡.试验处理组分别在玉米-豆粕基础日粮中添加0、20、40、80及120mg/kg的新型复合氨基酸络合铁(ZprFe)和80mg/kg硫酸亚铁(FeSO4).结果 表明:1)肉鸡日粮中添加ZprFe对内鸡平均日采食量、平均日增重、料重比均无显著差异(P＞0.05).2)日粮中添加Z
在湖北省开展猪流行性腹泻病毒(PEDV)的收集与分离鉴定,并对其进行遗传进化分析.将7份RT-PCR检测为阳性的病样接种Vero细胞,通过挑斑纯化及PCR鉴定,获得1株PEDV,命名为HB2018.通过Reed-Muench法测定其毒价为106.7TCID50/mL.该毒株S基因的遗传分析结果显示,其属于GⅡa亚群,与传统疫苗毒株CV777同源性只有93.76％;与目前的商品化疫苗株DR13、AJ1102与LW/L的同源性分别为93.52％,97.40％,97.00％.PEDV 4 mL/头接种26日龄断
为了解农机作业服务研究的现状、特点以及不足,探究农机作业服务的发展规律,为完善农机作业服务研究提供依据.从概念界定、发展历程、供需状况和影响效应等方面对农机作业服务的相关研究进行了系统梳理,对农机作业服务发展的理论基础和内在机制进行了归纳总结.结果 表明:农机作业服务的快速发展得益于有效市场和有为政府的结合,农户面临的劳动力约束、资金约束、技术约束和土地约束引致的需求,自然、经济、政治和社会因素引致的供给,供需作用形成了具有中国特色的农业机械化发展道路.目前农机作业服务研究主要集中于对需求侧和影响效应的分
为检测石榴花水提物(pomegranate flower water extract,PFW)中的主要活性成分及抗炎功效,采用显色法通过紫外分光光度仪对PFW中多糖、黄酮、生物碱、皂苷、多酚、蛋白等活性成分含量进行了检测,通过急性毒性试验确定了PFW的安全性,最后通过测定PFW对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀的抑制作用、血清细胞因子分泌及HE染色切片检测,确定PFW的抗炎作用.结果 显示,PFW中主要活性成分为多糖和多酚,含量分别为(43.84±1.94)％和(22.44±1.62)％,其余活性成分含量均低于1
为掌握福建省种鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的流行情况,采用ELISA方法对福州、莆田和龙岩3个地区6个种鸡场2470份血清样品和2848枚初产蛋分别进行ALV-J抗体和ALV p27抗原检测.结果 显示,福建地区的种鸡场均不同程度感染ALV,ALV-J抗体总阳性率为4.62％,且公鸡的阳性率低于母鸡,龙岩地区的ALV-J抗体阳性率最高,ALV p27抗原总阳性率为7.87％;蛋种鸡和肉种鸡均能感染ALV,蛋种鸡的ALV p27抗原阳性率明显低于肉种鸡;禽白血病阳性率在不同品系种鸡中存在差异,福建地方