【摘 要】
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目的探讨结直肠肿瘤中微小RNA(miRNA，miR)-29b对Tribbles假激酶2(TRIB2)调节的机制。方法利用网上在线数据库分析潜在结合TRIB2的3’端非编码区(3’UTR)的miRNA，选取其中评分最高的miR-29b进行研究；利用真核细胞转染技术，干扰结直肠肿瘤细胞中miR-29b的表达；蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心，武汉 430030；中山大学肿瘤防治中心 华南肿瘤学国家重点实验室 肿瘤医学协同创新中心 结直肠外科，广州 510060,华中科技大学同济医学院附属同济
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目的探讨结直肠肿瘤中微小RNA(miRNA，miR)-29b对Tribbles假激酶2(TRIB2)调节的机制。
方法利用网上在线数据库分析潜在结合TRIB2的3’端非编码区(3’UTR)的miRNA，选取其中评分最高的miR-29b进行研究；利用真核细胞转染技术，干扰结直肠肿瘤细胞中miR-29b的表达；蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中TRIB2的蛋白及mRNA表达差异；利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-29b结合在TRIB2-3’UTR上的具体位置；β-半乳糖苷酶染色法检测miR-29b对结直肠肿瘤细胞衰老的影响。统计学分析均应用SPSS 24.0软件进行，两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析。
结果在结肠癌细胞株中过表达miR-29b后，与对照组比较，TRIB2的mRNA水平下降至(63.468±4.154)%和(43.145±7.523)%(t＝5.351，P<0.01和t＝6.074，P<0.01)；转入针对miR-29b的inhibitor后，TRIB2的mRNA水平则升高至(205.033±27.070)%和(233.353±18.649)%(t＝4.663，P<0.01和t＝9.411，P<0.01)。与上述结果一致，转入miR-29b则抑制，inhibitor则上调TRIB2的蛋白水平。而在结肠癌细胞中过表达miR-29b后，野生型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性分别下降至(53.531±3.787)%和(45.051±1.728)%(t＝6.928，P<0.01和t＝15.570，P<0.01)，而突变型TRIB2-3’UTR质粒的荧光素酶活性只有轻微下降[下降至(87.366±3.825)%和(92.839±3.171)%，t＝5.578，P<0.01和t＝2.245，P>0.05]。过表达miR-29b后，结肠癌细胞中衰老的细胞比例从41.473%升高至62.085%(χ2＝19.731，P<0.01)，同时过表达TRIB2后，则下降至46.866%(χ2＝12.031，P<0.01)。
结论miR-29b可靶向调控TRIB2的表达，促进结直肠肿瘤的衰老。
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