【摘 要】
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目的 观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对肾脏球旁器颗粒细胞肾素分泌的调节作用.方法 密度梯度离心原代分离小鼠肾小球球旁器颗粒细胞(JGC).实时定量PCR法检测JGC内血管紧张素转换酶(ACE)、Ang Ⅱ受体(AT)1型和2型(AT1和AT2)mRNA表达.不同浓度的Ang Ⅱ与球旁器细胞共孵育后,放射免疫法测定上清中肾素活性;实时定量PCR法测定细胞内肾素mRNA表达;化学发光法测定细胞内、外环
【机 构】
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100730,北京,中国医学科学院北京协和医院肾内科,美国国立卫生研究院,100730,北京,中国医学科学院北京协和医院肾内科
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目的 观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对肾脏球旁器颗粒细胞肾素分泌的调节作用.方法 密度梯度离心原代分离小鼠肾小球球旁器颗粒细胞(JGC).实时定量PCR法检测JGC内血管紧张素转换酶(ACE)、Ang Ⅱ受体(AT)1型和2型(AT1和AT2)mRNA表达.不同浓度的Ang Ⅱ与球旁器细胞共孵育后,放射免疫法测定上清中肾素活性;实时定量PCR法测定细胞内肾素mRNA表达;化学发光法测定细胞内、外环磷酸腺苷(cAMP)水平的剂量和时间效应.改变细胞内钙离子浓度后,观察JGC内和上清中cAMP浓度改变.实时定量PCR法检测AngⅡ对JGC内腺苷酸环化酶(AC)5和AC6 mRNA表达的影响.结果 成功分离的JGC存在ACE、AT基因表达.AngⅡ可抑制JGC肾素分泌[(370.6±36.9)比(299.6±25.7)ng AngI·ml~(-1)·h~(-1),P=0.014],并能抑制基础状态和前列腺素E2、去甲肾上腺素诱导的肾素mRNA表达.Ang Ⅱ剂量依赖地降低JGC内和上清中cAMP水平.内质网上的Ca-ATP泵抑制剂毒胡萝卜内酯和环盐酸吗甲吡嗪酸均能剂量依赖地降低cAMP水平.细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM可降低细胞内钙离子浓度,进而使细胞内cAMP水平显著升高[(11.09±0.48)比(3.55±0.47)nmol/L,P<0.01].AngⅡ能通过减少42.12%的AC5 mRNA表达,进而抑制肾素分泌.结论 AngⅡ直接抑制肾素分泌可能是通过影响AC5,进而抑制cAMP表达来实现的.JGC内调节肾素分泌过程中,钙离子途径和GSα-cAMP两大信号传导途径中存在交联对话。
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