利用环介导等温扩增技术检测西尼罗病毒

来源 :第二军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jyk1987525
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目的建立一种早期快速检测西尼罗病毒的方法。方法以人工合成西尼罗病毒基因(1021~1240,NY99)作为模板,利用环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计合成3套6对引物,特异性识别人工合成西尼罗病毒基因的8个位点,在恒温63℃60min条件下扩增,80℃2min终止反应,通过real-timePCR仪实时监测反应过程,最终产物经凝胶电泳观察。同时将该方法的灵敏度及特异性与常规PCR进行比较。结果 LAMP反应在20min内即可完成,最终产物经电泳观察可见大小片段不等的呈梯度扩增条带,而同为黄病毒属的登革热病毒、流行性乙型脑炎病毒及阴性对照等均无扩增。灵敏性是常规PCR的10倍,可以检测到9.23copies/μl的病毒。结论该方法具有灵敏、特异、快速、简便、成本低等优点,适合基层和现场检测使用,对西尼罗病的早期诊断和流行病学筛查具有重要意义。
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