探讨外泌体(Exosome)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对甲状腺乳头状癌侵袭迁移的影响及两者之间的关系。
方法人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)。设置对照组(NC组)、Exosome组、Exosome＋小干扰RNA(siRNA)-RAGE组。采用电镜检测外泌体Exosome大小和形态；蛋白质印迹法(Western blot)检测RAGE、c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和微管蛋白(Tubulin)蛋白表达水平；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测c-Myc和Cyclin D1 mRNA水平；Traswell检测各组细胞的侵袭能力；划痕实验检测各组细胞迁移。采用双尾t检验。
结果电镜检测外泌体大小和形态正常，富含RAGE和CD63蛋白；与NC组比较，Exosome组的RAGE蛋白表达显著升高(t＝4.737，P<0.01)，与Exosome组比较，Exosome＋siRNA-RAGE组的RAGE蛋白表达显著降低(t＝2.315，P<0.05)，差异均有统计学意义；与NC组比较，Exosome组的c-Myc和Cyclin D1 mRNA和蛋白水平显著增加，Wnt/β-catenin信号通路激活，而siRNA-RAGE可阻止Exosome对此信号通路的激活；与NC组比较，Exosome组的上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin显著降低，Vimentin显著升高(t＝4.532、5.260，P<0.01)，与Exosome组比较，Exosome＋siRNA-RAGE组的E-cadherin显著升高，Vimentin显著降低(t＝2.653、2.411，P<0.05)，差异均有统计学意义；与NC组比较，Exosome组中的TPC-1细胞侵袭能力[侵袭细胞个数(394±7)个比(182±18)个]和迁移能力[划痕愈合面积(22±3)%比(96±4)%]显著增强(t＝3.814、5.260，P<0.01)，与Exosome组比较，Exosome＋siRNA-RAGE组中的TPC-1细胞侵袭能力[侵袭细胞个数(157±13)个比(394±7)个]和迁移能力[划痕愈合面积(34±4)%比(22±3)%]明显减弱(t＝2.512、2.643，P<0.05)，差异均有统计学意义。
结论甲状腺乳头状癌细胞外泌体中的RAGE可通过激活Wnt/β-catenin信号通路，下调E-cadherin和上调Vimentin，促进EMT进程，增强肿瘤细胞的侵袭和迁移。