【摘 要】
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目的:探讨hsa-miRNA-216a-5p(miR-216a)对人源性骨髓间充质干细胞(hMSC)成骨分化的影响并验证其对利尿钠肽受体3(NPR3)基因的靶向作用.方法:原代培养hMSC至第6代后诱导成骨分化;在分化第0、7和14天收集细胞,利用Real-time PCR验证miR-216a的正常表达;慢病毒介导外源性miR-216a在hMSC中高表达,经成骨诱导剂作用后,检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)及成骨相关转录因子抗体(Osterix)表达;茜素红染色细
【机 构】
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武汉市第四医院/华中科技大学同济医学院附属普爱医院骨科 湖北武汉430033
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目的:探讨hsa-miRNA-216a-5p(miR-216a)对人源性骨髓间充质干细胞(hMSC)成骨分化的影响并验证其对利尿钠肽受体3(NPR3)基因的靶向作用.方法:原代培养hMSC至第6代后诱导成骨分化;在分化第0、7和14天收集细胞,利用Real-time PCR验证miR-216a的正常表达;慢病毒介导外源性miR-216a在hMSC中高表达,经成骨诱导剂作用后,检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)及成骨相关转录因子抗体(Osterix)表达;茜素红染色细胞鉴定基质矿化;经TargetScan预测NPR3基因为miR-216a的靶基因后,检测miR-216a对NPR3表达的影响;构建包含NPR3-3\'UTR的荧光素酶表达质粒及其突变体,分别与miR-216a或阴性对照质粒共转染至HEK293细胞,通过测定荧光素酶表达推测miR-216与NPR3-3\'UTR的结合关系.结果:在hMSC向成骨细胞分化第7天和第14天,miR-216a表达下降;高表达外源性miR-216a导致hMSC体外成骨能力下降,特异性成骨基因ALP、RUNX2和Osterix随之降低;成骨分化过程中,NPR3的表达趋势与miR-216a相反;miR-216a通过NPR3的3\'UTR区降低荧光素酶表达活性;突变NPR3-3\'UTR上miR-216a结合位点的抑制作用消失.结论:在骨髓间充质干细胞的体外成骨分化过程中,miR-216a负性调控NPR3的表达.
其他文献
目的:回顾性分析新型冠状病毒肺炎(COVID-19)普通型患者和重型患者之间血栓标志物结果的特点,为临床诊疗提供依据.方法:收集2020年2月10日至3月10日在武汉大学中南医院住院的COVID-19确诊患者,包括95例COVID-19普通型患者和29例重型患者.分析D-二聚体(DD)和血栓标志物四项指标,包括血栓调节蛋白(TM)、凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)、纤溶酶-α2纤溶酶抑制物(PIC)和组织纤溶酶原激活物/抑制剂-1复合物(t-PAIC).以28例健康人群作为对照组,并进行统计学分析,采用Lo
目的:比较早期异位妊娠(EP)与早期妊娠患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素-1(Ang-1)和促血管生成素-2(Ang-2)的水平差异,从而确定其在早期异位妊娠诊断中的价值.方法:选取53例最终确诊为异位妊娠患者为研究对象(异位妊娠组),选择同期50例正常宫内早期妊娠患者为对照(正常早孕组),采用ELISA法检测两组患者血清中VEGF、Ang-1和Ang-2浓度.结果:与正常早孕组比较,异位妊娠组VEGF浓度明显升高,Ang-2浓度明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).VEGF单
目的:回顾性分析MⅠ期未成熟卵的临床应用价值,以期为未成熟卵的临床应用提供参考.方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心2018年3月至2020年1月行辅助生殖助孕的不孕症患者的临床资料,将胞浆内单精子注射(ICSI)中含有MⅠ期体外成熟卵子的375个新鲜周期作为研究对象,并将ICSI注射的3323枚成熟卵子(MⅡ)分为A组(体内成熟卵子)和B组(MⅠ期体外成熟卵子).再根据年龄的不同将A、B组各分为2个不同亚组:≤35岁(A1组、B1组);＞35岁(A2组、B2组),分别比较不同年
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目的:探讨多镜联合经胆囊管汇入部切开胆总管治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床效果.方法:对2018年6月-2020年12月收治的32例胆囊结石合并胆总管结石患者采用腹腔镜下联合胆道镜、十二指肠镜经胆囊管切开胆总管方法完成胆道探查取石一期缝合术的临床资料.结果:32例患者均顺利完成多镜联合经胆囊管切开胆总管取石一期缝合术,手术时间(124.38±21.65) min,术中出血量(25.94±9.18)mL.术后第1天淀粉酶(69.75±29.15) U/L,未出现术后胆漏、胰腺炎等并发症.术后一般第2天拔除鼻
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