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【摘要】 目的：观察淡豆豉醇提物对D-半乳糖致衰模型小鼠的抗衰老作用。方法：将50只小鼠随机分为5组：致衰模型组腹腔注射D-半乳糖，空白对照组注射生理盐水，两组均用生理盐水灌胃;低、中、高剂量组腹腔注射D-半乳糖，并用不同剂量的淡豆豉醇提物灌胃。7周后测定血清和脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平。结果：中、高剂量淡豆豉醇提物能提高血清和脑组织中SOD的活力，降低MDA水平。结论：淡豆豉醇提物具有较好的抗衰老作用。
【关键词】 淡豆豉;抗衰老;D-半乳糖衰老模型;SOD、MDA
【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B 【文章编号】2095―8439（2015）04―0004―02
Study on the anti-aging effect of injection of D- galactose in mice carrying dandouchi alcohol
Cai Kun Liu Lihao Song Juyan Luo Bin Cen Moujuan （Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guizhou， Guiyang， 550002）
【Abstract】 Objective： To observe the effect of dandouchi alcohol extract on aging mice induced by D- galactose anti-aging effect. Methods： Fifty mice were randomly divided into for five groups： induced aging model by intraperitoneal injection of D-galactose， blank control group was injected with normal saline， two groups were used physiological saline by gavage; low， ， the high dose group were intraperitoneal injection of D-galactose and with different doses of semen sojae praeparatum alcohol extract gavage. After 7 weeks， superoxide dismutase （SOD） and malondialdehyde （MDA） in serum and brain tissues were measured. Results： the high dose， dandouchi alcohol extract can improve the serum and brain tissue SOD activity， reduce the level of MDA. Conclusion： dandouchi alcohol extract has good anti-aging effect.
【keyword】 Dandouchi; anti aging; D- galactose model; SOD， MDA
衰老是生物随着时间的推移，自发的必然过程，它是复杂的自然过程现象。目前，针对衰老这一现象，研发中药抗衰老，通过多环节、多靶点、多途径调节整体机制，从而弥补部分西药在这一方面的不足，是当前抗衰老研究中的一个重点和难点。衰老过程中影响因素很多，其中SOD作为生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于生物体内，是生物体内清除自由基的首要物质，其在生物体内含量的高低是生物衰老和死亡的直观指标[1]。本次实验利用D-半乳糖致衰小鼠为模型，通过比较淡豆鼓醇提物干预前后大脑和血清中SOD活性及MDA含量的情况，评价淡豆鼓醇提物的抗衰老作用情况。
1 实验材料与仪器
1.1 药材 淡豆豉由本实验室制备。
1.2 动物 昆明种清洁级小鼠，体重（20±2）g，由重庆医科大学实验动物中心提供，雌雄各半[许可证号：SCXK（渝）2007-001]。
1.3 试剂 注射用D-半乳糖、小鼠SOD、MDA、GSH-PX检测试剂盒购自南京建成公司。
1.4 仪器 全自动酶标仪（ELX808，BIO RAD）;电动玻璃匀浆机（宁波新生生物科技公司）;台式冷冻离心机（美国sigma公司）。
2 方法
2.1 淡豆豉乙醇提取物的制备 淡豆豉干燥粉碎，用80%的乙醇提取两次，每次加热回流2h，合并提取液，回收乙醇，用旋转蒸发器蒸干得浸膏。
2.2 动物分组及给药 参照文献[2]，取3月龄昆明鼠50只，适应性饲养3～5天后，将小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。即：空白对照组、D-半乳糖致衰模型组、淡豆豉低剂量组（10mg/kg）、淡豆豉中剂量组（20mg/kg）、淡豆豉高剂量组（40mg/kg）。D-半乳糖致衰模型组和淡豆豉高、中、低剂量组腹腔注射D-半乳糖（80mg/kg/d），空白对照组腹腔注射等量生理盐水;注射同时，淡豆豉高、中、低剂量组分别灌胃相应剂量的淡豆豉提取物水溶液，空白对照组和D-半乳糖致衰模型组灌胃等量生理盐水，连续7周。
2.3 标本采集及检测 末次给药2h后，眼眶采血制备血清待测。随后颈椎脱臼处死小鼠，迅速取出脑组织，用冰的生理盐水制成匀浆，3500r/min离心后取上清液待测。
2.4 生化指标测定 血清和脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力测定和丙二醛（MDA）含量测定均按试剂盒说明操作，用酶标仪检测OD值。 2.5 数据处理 数据用SPSS17.0统计软件采用t检验进行分析，以x?±s表示。
3 结果与分析
3.1 淡豆豉醇提物对小鼠血清各生化指标的影响 如表1所示，与空白对照组相比，模型组血清SOD的活力明显降低（P<0.05），MDA水平显著增加（P<0.05）;淡豆豉醇提物中、高剂量组血清中SOD的活力明显升高（P<0.05），MDA水平显著降低（P<0.05）;低剂量组与模型组比较无明显差异。
3.2 淡豆豉醇提物对小鼠脑组织中各生化指标的影响 如表1所示，模型组脑组织中SOD的活力比对照组明显降低（P<0.05），MDA水平比对照组显著增加（P<0.05）;淡豆豉醇提物中、高剂量可显著增加D-半乳糖致衰小鼠的SOD的活力（P<0.05），显著降低MDA水平（P<0.05）;低剂量组与模型组比较无显著性差异（P>0.05）。
与模型组比较*P<0.05
4 讨论
自由基学说认为，随着年龄的增长，由于机体内的抗氧化酶活力急剧下降，因此无法及时清除体内产生的自由基，过剩的自由基导致体内细胞功能严重受损以致衰老、死亡[3]。在本次实验中，通过注射D-半乳糖导致小鼠病理性衰老，对比空白对照组的生理衰老现象，模型组的衰老更明显，包括饮食量减少、皮毛的松弛等。
衰老过程中自由基的大量产生可加速组织损伤，促进衰老。MDA可以反映体内自由基累积的水平，而SOD是一类机体中重要的抗氧化酶，可以清除自由基。实验结果表明，经D-半乳糖诱导的老化模型小鼠血清和脑组织中SOD活力下降，这说明D-半乳糖对小鼠血清和脑组织中抗氧化酶均有破坏作用，使其清除有害过氧化物、减轻和阻断脂质过氧化连锁反应的能力减弱。淡豆豉醇提物高中剂量组的小鼠血清和脑组织中SOD活性均高于模型对照组，而MDA含量均较模型组降低，说明长期摄食这种中药对D-半乳糖导致的快速老化小鼠有明显的保护作用，可延缓衰老的发生。
淡豆豉是一味解表除烦的常用中药，在健胃、助消化、除热消烦等方面有良好的治疗作用[3]。研究发现，淡豆豉的醇提物中含有丰富的异黄酮类成分和少量有机酸[4]。实验表明，淡豆豉醇提物具有明显的抗衰老作用，但具体是其中的哪种成分起主要作用还需进一步深入研究。
[1] 童坦君，张宗玉. 衰老机制及其学说[J]. 生理科学进展，2007，38（1）：14.
[2] 刘明娟，颜礼友. 补肾益寿片对注射D-半乳糖小鼠的抗衰老作用[J]. 中成药，2014，，36（5）：909.
[3] 孙晓生，杨柳. 抗衰老机制与药物的研究进展[J]. 广州中医药大学学报，2009，26（6）：593.
[4] 袁珊琴，于能江. 淡豆豉中的化学成分[J].中药材，2008，31（8）：1172.
【关键词】 淡豆豉;抗衰老;D-半乳糖衰老模型;SOD、MDA
【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B 【文章编号】2095―8439（2015）04―0004―02
Study on the anti-aging effect of injection of D- galactose in mice carrying dandouchi alcohol
Cai Kun Liu Lihao Song Juyan Luo Bin Cen Moujuan （Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guizhou， Guiyang， 550002）
【Abstract】 Objective： To observe the effect of dandouchi alcohol extract on aging mice induced by D- galactose anti-aging effect. Methods： Fifty mice were randomly divided into for five groups： induced aging model by intraperitoneal injection of D-galactose， blank control group was injected with normal saline， two groups were used physiological saline by gavage; low， ， the high dose group were intraperitoneal injection of D-galactose and with different doses of semen sojae praeparatum alcohol extract gavage. After 7 weeks， superoxide dismutase （SOD） and malondialdehyde （MDA） in serum and brain tissues were measured. Results： the high dose， dandouchi alcohol extract can improve the serum and brain tissue SOD activity， reduce the level of MDA. Conclusion： dandouchi alcohol extract has good anti-aging effect.
【keyword】 Dandouchi; anti aging; D- galactose model; SOD， MDA
衰老是生物随着时间的推移，自发的必然过程，它是复杂的自然过程现象。目前，针对衰老这一现象，研发中药抗衰老，通过多环节、多靶点、多途径调节整体机制，从而弥补部分西药在这一方面的不足，是当前抗衰老研究中的一个重点和难点。衰老过程中影响因素很多，其中SOD作为生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于生物体内，是生物体内清除自由基的首要物质，其在生物体内含量的高低是生物衰老和死亡的直观指标[1]。本次实验利用D-半乳糖致衰小鼠为模型，通过比较淡豆鼓醇提物干预前后大脑和血清中SOD活性及MDA含量的情况，评价淡豆鼓醇提物的抗衰老作用情况。
1 实验材料与仪器
1.1 药材 淡豆豉由本实验室制备。
1.2 动物 昆明种清洁级小鼠，体重（20±2）g，由重庆医科大学实验动物中心提供，雌雄各半[许可证号：SCXK（渝）2007-001]。
1.3 试剂 注射用D-半乳糖、小鼠SOD、MDA、GSH-PX检测试剂盒购自南京建成公司。
1.4 仪器 全自动酶标仪（ELX808，BIO RAD）;电动玻璃匀浆机（宁波新生生物科技公司）;台式冷冻离心机（美国sigma公司）。
2 方法
2.1 淡豆豉乙醇提取物的制备 淡豆豉干燥粉碎，用80%的乙醇提取两次，每次加热回流2h，合并提取液，回收乙醇，用旋转蒸发器蒸干得浸膏。
2.2 动物分组及给药 参照文献[2]，取3月龄昆明鼠50只，适应性饲养3～5天后，将小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。即：空白对照组、D-半乳糖致衰模型组、淡豆豉低剂量组（10mg/kg）、淡豆豉中剂量组（20mg/kg）、淡豆豉高剂量组（40mg/kg）。D-半乳糖致衰模型组和淡豆豉高、中、低剂量组腹腔注射D-半乳糖（80mg/kg/d），空白对照组腹腔注射等量生理盐水;注射同时，淡豆豉高、中、低剂量组分别灌胃相应剂量的淡豆豉提取物水溶液，空白对照组和D-半乳糖致衰模型组灌胃等量生理盐水，连续7周。
2.3 标本采集及检测 末次给药2h后，眼眶采血制备血清待测。随后颈椎脱臼处死小鼠，迅速取出脑组织，用冰的生理盐水制成匀浆，3500r/min离心后取上清液待测。
2.4 生化指标测定 血清和脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力测定和丙二醛（MDA）含量测定均按试剂盒说明操作，用酶标仪检测OD值。 2.5 数据处理 数据用SPSS17.0统计软件采用t检验进行分析，以x?±s表示。
3 结果与分析
3.1 淡豆豉醇提物对小鼠血清各生化指标的影响 如表1所示，与空白对照组相比，模型组血清SOD的活力明显降低（P<0.05），MDA水平显著增加（P<0.05）;淡豆豉醇提物中、高剂量组血清中SOD的活力明显升高（P<0.05），MDA水平显著降低（P<0.05）;低剂量组与模型组比较无明显差异。
3.2 淡豆豉醇提物对小鼠脑组织中各生化指标的影响 如表1所示，模型组脑组织中SOD的活力比对照组明显降低（P<0.05），MDA水平比对照组显著增加（P<0.05）;淡豆豉醇提物中、高剂量可显著增加D-半乳糖致衰小鼠的SOD的活力（P<0.05），显著降低MDA水平（P<0.05）;低剂量组与模型组比较无显著性差异（P>0.05）。
与模型组比较*P<0.05
4 讨论
自由基学说认为，随着年龄的增长，由于机体内的抗氧化酶活力急剧下降，因此无法及时清除体内产生的自由基，过剩的自由基导致体内细胞功能严重受损以致衰老、死亡[3]。在本次实验中，通过注射D-半乳糖导致小鼠病理性衰老，对比空白对照组的生理衰老现象，模型组的衰老更明显，包括饮食量减少、皮毛的松弛等。
衰老过程中自由基的大量产生可加速组织损伤，促进衰老。MDA可以反映体内自由基累积的水平，而SOD是一类机体中重要的抗氧化酶，可以清除自由基。实验结果表明，经D-半乳糖诱导的老化模型小鼠血清和脑组织中SOD活力下降，这说明D-半乳糖对小鼠血清和脑组织中抗氧化酶均有破坏作用，使其清除有害过氧化物、减轻和阻断脂质过氧化连锁反应的能力减弱。淡豆豉醇提物高中剂量组的小鼠血清和脑组织中SOD活性均高于模型对照组，而MDA含量均较模型组降低，说明长期摄食这种中药对D-半乳糖导致的快速老化小鼠有明显的保护作用，可延缓衰老的发生。
淡豆豉是一味解表除烦的常用中药，在健胃、助消化、除热消烦等方面有良好的治疗作用[3]。研究发现，淡豆豉的醇提物中含有丰富的异黄酮类成分和少量有机酸[4]。实验表明，淡豆豉醇提物具有明显的抗衰老作用，但具体是其中的哪种成分起主要作用还需进一步深入研究。
[1] 童坦君，张宗玉. 衰老机制及其学说[J]. 生理科学进展，2007，38（1）：14.
[2] 刘明娟，颜礼友. 补肾益寿片对注射D-半乳糖小鼠的抗衰老作用[J]. 中成药，2014，，36（5）：909.
[3] 孙晓生，杨柳. 抗衰老机制与药物的研究进展[J]. 广州中医药大学学报，2009，26（6）：593.
[4] 袁珊琴，于能江. 淡豆豉中的化学成分[J].中药材，2008，31（8）：1172.